辣椒素和RTX對DRG神經(jīng)元P物質(zhì)釋放及TRPV1表達的影響作用.pdf

1、辣椒素(capsaicin，CAP)是紅辣椒中的主要成分，它可以選擇性的激活感覺神經(jīng)元，向中樞神經(jīng)系統(tǒng)傳導傷害性刺激從而產(chǎn)生灼痛。樹膠脂毒素（resiniferatoxin，RTX）屬于辣椒素的高效能類似物，與辣椒素在結(jié)構(gòu)上有顯著的不同，卻有相似的生物學活性。CAP和RTX都可以與辣椒素受體(transientreceptor potential vanilloid type1，TRPVl)結(jié)合，在治療神經(jīng)源性炎癥等方面可發(fā)揮重要的作用

2、。
　　 TRPV1是存在于細胞膜上的一種非選擇性的配體門控性陽離子通道，是感受傷害性刺激的分子感受器，在傷害性刺激信息轉(zhuǎn)導過程中起著關(guān)鍵作用。TRPVI對于炎性熱痛覺過敏的形成是至關(guān)重要的，被認為是疼痛調(diào)節(jié)的關(guān)鍵物質(zhì)。
　　 背根神經(jīng)節(jié)（dorsal root ganglion，DRG）是感受傷害性刺激的初級傳入神經(jīng)元胞體所在的部位。其中對CAP敏感的感覺神經(jīng)元可表達TRPV1，這類神經(jīng)元大多數(shù)的是中、小直徑的神經(jīng)元，

3、其神經(jīng)纖維為無髓的C類纖維或薄髓的Aδ纖維，主要傳導痛覺的刺激。CAP通過與該類神經(jīng)元上的TRPVl結(jié)合，激活與受體直接偶聯(lián)的膜離子通道，可引發(fā)神經(jīng)肽的釋放。
　　 P物質(zhì)（substance P，SP）是一種由感覺神經(jīng)纖維末梢分泌的，分布于感覺神經(jīng)支配的外周組織的神經(jīng)肽。SP的釋放基于適度的刺激，它在傷害性感覺以及神經(jīng)源性炎癥發(fā)生機制中起著重要作用。大部分TRPV1免疫反應陽性的DRG神經(jīng)元表達SP，SP的釋放與TRPV1的激

4、活密切相關(guān)。
　　 CAP和RTX對間質(zhì)性膀胱炎等神經(jīng)源性疾病的潛在的治療作用越來越受到重視，但二者在對TRPV1的親和力、感覺神經(jīng)肽的耗竭以及初級傳入神經(jīng)元神經(jīng)毒性等方面存在差異，有待于進一步闡明。
　　 本實驗旨在探討，不同濃度CAP和RTX對培養(yǎng)的DRG神經(jīng)元SP的釋放及TRPV1表達影響的異同。
　　 本實驗將原代培養(yǎng)的15d胎鼠DRG神經(jīng)元，在體外分散培養(yǎng)72h后，分別用CAP（1μmol/L，10μm

5、ol/L）和RTX（10 nmol/L，100 nmol/L）進行處理10 min，然后用放射免疫分析法(radioimmunoassay,RIA)檢測感覺神經(jīng)肽SP的釋放，并更換培養(yǎng)液再培養(yǎng)6d。再用RIA測定SP的釋放，用RT-PCR方法檢測編碼SP的前速激肽原(preprotachykinin，PPT)mRNA和TRPVl mRNA的表達，用Western blot方法檢測SP和TRPV1蛋白的表達。
　　 本實驗結(jié)果如下

6、：
　　 (1)CAP或RTX急性刺激對SP釋放的影響
　　 用RIA法檢測CAP或RTX引發(fā)的DRG神經(jīng)元SP的釋放，結(jié)果顯示：分散培養(yǎng)72 h的DRG神經(jīng)元受CAP或RTX刺激10 min后，SP釋放較對照組顯著增加。刺激后6d，SP釋放較對照組減少。
　　 (2)CAP或RTX對PPTmRNA和TRPVl mRNA的影響
　　 分散培養(yǎng)3d的DRG神經(jīng)元受CAP或RTX刺激10 min后，更換新培養(yǎng)

7、液繼續(xù)培養(yǎng)6d，用RT-PCR檢測PPTmRNA和TRPVl mRNA的表達水平。結(jié)果顯示：CAP或高濃度RTX使PPTmRNA和TRPV-lmRNA水平下降，而低濃度的RTX則對其沒有影響。
　　 (3)CAP或RTX對SP和TRPV1蛋白表達的影響
　　 分散培養(yǎng)3d的DRG神經(jīng)元受CAP或RTX刺激10 min后，更換新培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)6d，用Western blot檢測SP和TRPVI蛋白的表達，結(jié)果顯示：DRG神