PCBP1對帕金森病大鼠模型的影響.pdf

1、目的：
　　 為了明確poly(rC)-結(jié)合蛋白1(poly(rC)binding protein1，PCBP1)是否參與帕金森病(parkinson's disease，PD)的病理進(jìn)程，本研究利用6-OHDA損傷大鼠紋狀體的PD模型，通過腺相關(guān)病毒(rAAV)將PCBP1重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染大鼠神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，探討在帕金森病發(fā)生過程中與PCBP1可能存在的關(guān)系以及PCBP1對神經(jīng)元的調(diào)節(jié)和保護(hù)作用。旨在為臨床運(yùn)用病毒治療PD提供可

2、靠的理論基礎(chǔ)，并為PD的治療發(fā)現(xiàn)潛在的靶點(diǎn)和新的思路。
　　 材料與方法：
　　 SD雄性大鼠（200-250g），用6-OHDA注射紋狀體雙側(cè)損傷的PD大鼠模型，隨機(jī)分為6-OHDA損傷組，6-OHDA+PCBP1腺相關(guān)病毒治療組和空病毒對照組。治療組在rAAV2-PCBP1-EGFP注射左側(cè)紋狀體手術(shù)一周后于雙側(cè)紋狀體注射6-OHDA24ug。一周后開始每周一次的行為學(xué)檢測，連續(xù)檢測六周。6-OHDA注射第七周時(shí)迅速

3、處死動(dòng)物。對照組在相同時(shí)間檢測行為和取材。
　　 1.用旋轉(zhuǎn)行為測轉(zhuǎn)儀檢測不同劑量6-OHDA對由阿撲嗎啡（Apomorphin Apo）誘發(fā)的大鼠異常旋轉(zhuǎn)行為；
　　 2.用免疫組織化學(xué)方法檢測不同劑量6-OHDA對大鼠TH的改變和多巴胺神經(jīng)元生存率的變化；
　　 3.用共聚焦顯微鏡檢測rAAV2-PCBP1-EGFP在神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)；
　　 4.用Local motion測試實(shí)驗(yàn)來檢測對照組，造模

4、組和病毒治療組大鼠的行為學(xué)改變；
　　 5.用免疫組化來檢測PCBP1在對照組，造模組和病毒治療組神經(jīng)元內(nèi)的表達(dá)含量；
　　 6.用western來檢測對照組，造模組和病毒治療組神經(jīng)元內(nèi)的TH和HSP70的含量。
　　 結(jié)果：
　　 1.6-OHDA注射紋狀體的PD大鼠模型在損傷4周后，各組均出現(xiàn)由Apo誘發(fā)的異常旋轉(zhuǎn)行為；隨著6-OHDA劑量的加大其異常旋轉(zhuǎn)次數(shù)也增加并隨著時(shí)間推移呈進(jìn)行性加重，24ug

5、,32ug組與對照組比較具有顯著差異(p＜0.01)；免疫組化也顯示紋狀體TH陽性神經(jīng)纖維出現(xiàn)不同程度的死亡，在8w時(shí)損傷側(cè)占為損傷側(cè)的神經(jīng)纖維百分比分別是79％和75％。
　　 2.將不同劑量的rAAV2-PCBP1-EGFP注射入大鼠紋狀體內(nèi)，并用激光共聚焦顯微鏡觀察其不同時(shí)程在神經(jīng)元的表達(dá)，結(jié)果顯示，rAAV2-PCBP1-EGFP在大鼠紋狀體內(nèi)注射1w開始表達(dá)，一直持續(xù)到8w。
　　 3.Local motion

6、測試實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，病毒治療組與模型組相比，其行為學(xué)有明顯改善(p＜0.01)，免疫組織化學(xué)結(jié)果也顯示，與模型組相比，病毒治療組神經(jīng)元內(nèi)的PCBP1的表達(dá)含量增多；
　　 4.Western蛋白免疫印跡法檢測6-OHDA大鼠中腦黑質(zhì)TH蛋白和HSP7蛋白的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)PCBP1有對抗6-OHDA大鼠中腦黑質(zhì)TH蛋白表達(dá)減少的趨勢；PCBP1有提高黑質(zhì)部位HSP70蛋白表達(dá)增多的趨勢。
　　 結(jié)論：
　　 1.6-

7、OHDA注射紋狀體造成的PD大鼠模型引起了黑質(zhì)(SNc)DA能神經(jīng)元出現(xiàn)進(jìn)行性、逆行退變，是研究預(yù)保護(hù)和早期治療PD的一種適宜動(dòng)物模型；
　　 2.首次在6-OHDA注射紋狀體的PD模型中證實(shí)了PCBP1對多巴胺能神經(jīng)元具有一定的神經(jīng)保護(hù)作用；
　　 3.在6-OHDA注射紋狀體造成的PD大鼠模型中，證實(shí)2×2ul rAAV2-PCBP1-EGFP（基因組顆粒滴度2.5×1011vg/ml）治療可以明顯改善大鼠的運(yùn)動(dòng)能力