柴胡對補(bǔ)體和大鼠急性肺損傷的作用.pdf

1、補(bǔ)體系統(tǒng)是體內(nèi)非特異性免疫系統(tǒng)的重要組成部分之一,在機(jī)體的防御機(jī)能、免疫功能的調(diào)節(jié)以及免疫病理過程中起著重要作用。同時(shí),補(bǔ)體系統(tǒng)也是重要的炎癥媒介物質(zhì),其非正常激活會引發(fā)人體自身組織嚴(yán)重的病理損傷。急性肺損傷(acutelunginjury,ALI)/急性呼吸窘迫綜合征(acuterespiratorydistresssyndrome,ARDS)是臨床上較為常見的危急重癥,病人常由于急性低氧性呼吸功能不全或衰竭而導(dǎo)致死亡。有研究表明,補(bǔ)

2、體系統(tǒng)的活化與該疾病的發(fā)展過程相關(guān)。柴胡是一種常用的中藥,可用于治療炎癥疾病和自身免疫性疾病等,小葉黑柴胡(Bupleurumsmithii,B.smithii)的根部在中藥中也被當(dāng)作柴胡使用。先前的實(shí)驗(yàn)表明,柴胡具有抗補(bǔ)體溶血的作用,但藥物的作用位點(diǎn)仍有疑問。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)也表明,柴胡對大鼠急性呼吸窘迫綜合征模型具有保護(hù)作用,但尚無直接證據(jù)表明柴胡在體內(nèi)是通過抑制補(bǔ)體系統(tǒng)而產(chǎn)生作用的。
　　 本課題采用溶血實(shí)驗(yàn),通過觀察補(bǔ)體經(jīng)典激活

3、途徑和旁路激活途徑中的中藥抑制溶血的情況,來確認(rèn)柴胡的作用位點(diǎn),并對現(xiàn)有模型中的大鼠肺部組織切片進(jìn)行染色,確定是否存在補(bǔ)體沉積,然后對模型進(jìn)行改進(jìn),增加血?dú)夥治鲋笜?biāo),完善該模型,為以后的實(shí)驗(yàn)提供指導(dǎo)。
　　 第一部分柴胡總多糖對補(bǔ)體系統(tǒng)的抑制作用
　　 目的：研究柴胡總多糖對補(bǔ)體系統(tǒng)的作用。方法：將柴胡總多糖分別與補(bǔ)體溶血實(shí)驗(yàn)中的某一要素混合,作用一段時(shí)間后再加入其他組分,觀測體系的溶血情況,探討其對補(bǔ)體經(jīng)典途徑或旁路途

4、徑激活的作用。結(jié)果：在經(jīng)典激活途徑中,柴胡總多糖與補(bǔ)體預(yù)先混合,能降低體系最終的溶血,而與溶血素或羊紅細(xì)胞預(yù)先混合,體系的溶血無明顯改變。在旁路激活途徑中,柴胡總多糖與補(bǔ)體預(yù)先混合也能降低體系最終的溶血,而與兔紅細(xì)胞預(yù)先混合,體系的溶血無明顯改變。結(jié)論：柴胡總多糖通過抑制補(bǔ)體,從而對溶血產(chǎn)生影響。
　　 第二部分大鼠急性肺損傷中補(bǔ)體在肺部組織的沉積
　　 目的：建立大鼠ALI模型,觀察補(bǔ)體在肺部組織的沉積及柴胡總多糖對動

5、物的保護(hù)作用。方法：通過缺血再灌注和內(nèi)毒素氣道滴注建立兩次打擊大鼠ALI模型,監(jiān)測大鼠血清總補(bǔ)體活性和血液中CO2濃度的變化,并采用H&E染色和免疫組化的方法觀察動物肺部組織的病變情況及補(bǔ)體C3c沉積情況。結(jié)果：與偽手術(shù)組血樣CO2濃度有所上升、補(bǔ)體活性略微下降相比,造模組和陰性對照組的血樣CO2濃度出現(xiàn)大幅度上升、補(bǔ)體活性小幅下降,而柴胡組和陽性藥物組的血樣CO2濃度上升幅度相對較小、補(bǔ)體活性大幅下降。H&E染色結(jié)果顯示偽手術(shù)組動物的

6、肺部基本無損傷,造模組及陰性對照組的動物肺部損傷嚴(yán)重,而柴胡組和陽性藥物組的動物肺部損傷情況較輕。免疫組化結(jié)果也顯示造模組和陰性對照組的動物肺部有大量補(bǔ)體C3c沉積,柴胡組、陽性藥物組和偽手術(shù)組動物的肺部基本看不到補(bǔ)體沉積。結(jié)論：柴胡總多糖在體內(nèi)具有抑制補(bǔ)體的作用,且能改善缺血再灌注和內(nèi)毒素引起的肺部炎癥,有緩解大鼠ALI的作用,同時(shí)伴有肺組織補(bǔ)體沉積的顯著減少。
　　 第三部分大鼠急性肺損傷模型中的問題探討
　　 目的

7、：改進(jìn)現(xiàn)有的大鼠ALI模型,探討模型制作過程中遇到的問題。方法：通過缺血再灌注和內(nèi)毒素氣道滴注建立兩次打擊大鼠ALI模型,測定大鼠血清補(bǔ)體溶血活性,并用兩種方法測定動脈血氧分壓(PaO2)和二氧化碳分壓(PaCO2)的變化。結(jié)果：造模組與正常對照組相比,PaO2隨造模時(shí)間延長明顯下降,PaCO2有所上升,偽手術(shù)組與正常對照組血?dú)夥治鲋迪喈?dāng)。采用全自動血?dú)夥治鰞x測定的值比實(shí)驗(yàn)室用相應(yīng)氧電極和二氧化碳電極測定更為合理、準(zhǔn)確且精密度高。補(bǔ)體溶