地塞米松對鹽酸吸入誘導大鼠急性肺損傷的保護作用.pdf

1、背景和目的 胃內容物誤吸是臨床麻醉及其他危重癥治療過程中的嚴重的并發(fā)癥，因目前尚無有效的治療手段，因此對返流、誤吸的防治一直是臨床麻醉學領域一項重要的研究課題。目前對于吸入胃液的主要成分一鹽酸復制的動物模型的研究認為，鹽酸吸入后引起的繼發(fā)滲出性炎癥反應，其病理改變類似于急性呼吸窘迫綜合征(Acute respiratory distresssyndrome，ARDS)，而ARDS的發(fā)生是由于細胞因子網絡的失衡，致炎因子表達過度，

2、使多形核白細胞(Polymorphonucleameutrophils，PMN)大量激活并在炎癥部位聚集，釋放活性氧代謝產物(Reactive oxygen species，ROS)及蛋白水解酶，造成肺組織損傷。隨著臨床評價和實驗研究的進展，臨床醫(yī)師逐步認識到糖皮質激素對急性肺損傷的治療作用，但對該藥應用的時機、劑量、療程國內外存在爭議，目前認為早期、中小劑量、延長時間、逐漸減量的治療方案可取。本實驗通過氣管內滴注鹽酸(1.2ml/kg

3、,PH=1.25)的方法復制大鼠急性肺損傷(acute lung injury,ALI)模型；探討小劑量(2mg/kg)地塞米松(Dexamethasone，Dex)對鹽酸吸入所致大鼠ALI的防治作用及其可能機制，為臨床治療ALI提供理論基礎和合理用藥方向。材料與方法模型建立和分組：應用鹽酸氣管內滴注復制大鼠ALI模型。將72只SD純種成年雄性大白鼠隨機分成4組(每組18只)：正常對照組(A組)、損傷組(B組)、治療一組(C組)，治療二

4、組(D組)，A組氣管內滴注生理鹽水(1．2ml/kg)后即刻腹腔內注射生理鹽水O．5ml，B組氣管內滴注HCL，(1．2ml/kg，PH=1．25)后即刻腹腔內注射生理鹽水0．5ml，C組氣管內滴注HCL(1．2ml/kg，：PH=1．25)后即刻以Dex(2mg/kg)腹腔內注射(溶于0．5ml生理鹽水)，D組氣管內滴注HCL．2ml/kg，PH=1．25)30min后Dex(2mg/kg)腹腔內注射(溶于0．5ml生理鹽水)。以上各

5、組每組18只大鼠，氣管內滴入鹽酸或生理鹽水時間點為零時間點，實驗第1、2、6h各處死6只大鼠。各組大鼠按預設時間處死并收集標本用于觀察和測定。股動脈取血4℃低溫離心(3000r/min)10min，留取上清液，-70℃超低溫冰箱保存，待測定血清腫瘤壞死因子-α水平，放血處死動物，快速開胸取肺。用4﹪甲醛固定右下肺葉，在光鏡下觀察肺組織的病理改變；右上肺取材4﹪甲醛固定保存，透射電鏡下觀察肺毛細血管基底膜和Ⅱ型肺泡上皮細胞的病理變化：右中

6、肺稱濕重后置于80℃烤箱，48h后，稱干重并計算W/D；隨后用4℃生理鹽水3ml分兩次進行左肺灌洗，取搖勻的灌洗液原液1滴，于400倍高倍鏡下做細胞總數(shù)計數(shù)(除上皮細胞及紅細胞)，灌洗液4℃低溫離心(3000r/min)10min，留取上清液，-70℃超低溫冰箱保存，待以后批量測定蛋白含量及腫瘤壞死因子-α、IL-8、IL-10水平。采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件包行單因素方差分析或采用重復測量數(shù)據(jù)的方差分析，方差不齊則行變量變換后再做統(tǒng)

7、計分析，取α=0.05作為檢驗水準。所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準差(x±s)表示。 結果 (1)普通光學顯微鏡觀察石蠟切片HE染色可見A組無明顯損傷或損傷輕微，肺泡結構完整，肺泡壁無水腫，有少量白細胞浸潤。B組損傷最明顯，可見肺泡壁破壞嚴重，彌漫性充血水腫，肺間質、肺泡水腫，肺泡間隔增寬，大部分肺泡萎陷、肺實變，肺內大量多形核白細胞(PMN)浸潤。C組肺組織損傷程度較B組減輕，見肺間質有輕度或中度水腫，白細胞浸潤程度較輕。D組

8、肺組織損傷程度介于B、C組之間. (2)透射電子顯微鏡觀察A組肺毛細血管基底膜完整，毛細血管內皮細胞正常，肺泡Ⅱ型上皮細胞呈圓形或橢圓形，胞漿豐富，游離面微絨毛完整，板層體結構完整，呈圓形，有包膜，內見電子密度較高并呈同心圓排列的層狀結構；B組可見毛細血管內皮細胞腫脹，內皮細胞間隙增寬，肺泡Ⅱ型上皮細胞微絨毛破壞程度嚴重，微絨毛變短、減少甚至消失，Ⅱ型上皮細胞板層體排空；C、D組游離面微絨毛輕度破壞。 (3)肺濕/干重

9、比(W/D)B、C、D三組的肺濕/干重比較A組升高(p<0.05)，C組較B、D組降低(p<0.05)，B、D組肺濕/干重比無統(tǒng)計學差異(p>0.05)。 (4)BALF細胞總數(shù)與蛋白水平在各個時間點，四組BALF細胞總數(shù)均有統(tǒng)計學差異(p<0.05)，從高到低依次是損傷組、治療二組、治療一組、對照組。與對照組比較，其余三組BALF中蛋白水平在各時間點均增高(p<0.05)；與損傷組比較，治療一組BAI。F中蛋白水平在各時間點

10、均下降(p<0.05)，治療二組在各時間點無統(tǒng)計學差異(p>0.05)。 (5)血清及BALF中TNF-α濃度與對照組比較，其余三組血清及BALF中TNF-α濃度在各時間點均增高(p<0.05)；與損傷組比較，治療一組血清及BALF中TNF-α濃度在各時間點均下降(p<0.05)，治療二組血清TNF-α濃度無統(tǒng)計學差異(p>0.05)，BALF中TNF-α濃度下降(p<0.05)。 (6)BALF中IL-8和IL-10濃

11、度與對照組比較，其余三組BALF中IL-8濃度在各時間點均增高(p<0.05)，與損傷組比較，治療一組BALF中IL-8濃度在各時間點均下降(p<0.05)，治療二組BALF中IL-8濃度無統(tǒng)計學差異(p>0.05)。 與對照組比較，其余三組BALF中IL-10濃度在各時間點均增高(p<0.05)，與損傷組比較，治療一組和治療二組BALF中IL-10濃度在各時間點均升高(p<0.05)，與治療一組比較，治療二組BALF中IL-1