脂多糖激活補(bǔ)體對內(nèi)皮細(xì)胞的作用及抑制補(bǔ)體對脂多糖致急性肺損傷的影響.pdf

1、目的:在細(xì)胞水平上研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)激活血清補(bǔ)體對內(nèi)皮細(xì)胞的作用和影響。評價特定抗補(bǔ)體活性物質(zhì)對LPS激活補(bǔ)體損傷內(nèi)皮細(xì)胞以及LPS致急性肺損傷(acutelunginjury,ALI)的保護(hù)作用。
　　 方法:研究LPS激活血清補(bǔ)體的作用方式和特點(diǎn),觀察LPS激活補(bǔ)體對內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)粘附分子和凋亡的影響。采用ELISA法檢測內(nèi)皮細(xì)胞釋放P-selectin、E-selectin和ICAM-

2、1的變化,化學(xué)發(fā)光法檢測Caspase-3/7的活化情況,SRB法檢測LPS激活補(bǔ)體對內(nèi)皮細(xì)胞生長的影響。在前期工作中發(fā)現(xiàn),香椿果活性多酚是一個高活性的抗補(bǔ)體物質(zhì),能強(qiáng)烈地抑制補(bǔ)體激活。本實(shí)驗(yàn)通過測定內(nèi)皮細(xì)胞P-selectin、E-selectin、ICAM-1和Caspase-3/7的變化情況,評價香椿果抗補(bǔ)體活性多酚對LPS激活血清補(bǔ)體損傷內(nèi)皮細(xì)胞的作用。動物實(shí)驗(yàn)采用LPS致ALI模型,其中控制補(bǔ)體的實(shí)驗(yàn)組分別提前2h給予蛇毒新型

3、抗補(bǔ)體蛋白AtraseA和提前24h給予眼鏡蛇毒因子(cobravenomfactor,CVF)。在給予LPS后1h、6h、12h采集標(biāo)本,測定各組血清補(bǔ)體活性和肺含水量,取支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolarlavagefluid,BALF)測定細(xì)胞數(shù)、蛋白含量、TNF-α、P-selectin含量,比色法測定肺組織勻漿中髓過氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)含量,取肺組織行病理切片檢查,評價兩種抗補(bǔ)體蛋白

4、對大鼠ALI的保護(hù)作用。
　　 結(jié)果:LPS能夠激活血清補(bǔ)體,這種激活呈現(xiàn)量效、時效性。LPS激活血清補(bǔ)體可誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞瞬時顯著釋放P-selectin,E-selectin和ICAM-1表達(dá)也明顯上調(diào),同時可導(dǎo)致Caspase-3/7的活化。在本實(shí)驗(yàn)條件下,LPS激活血清補(bǔ)體對內(nèi)皮細(xì)胞生長未產(chǎn)生抑制。香椿果抗補(bǔ)體活性多酚不能下調(diào)LPS激活補(bǔ)體損傷內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)粘附分子和誘導(dǎo)凋亡。在動物實(shí)驗(yàn)中,模型組給予LPS后出現(xiàn)了典型的ALI

5、癥狀,大鼠血清補(bǔ)體活性明顯下降?？寡a(bǔ)體蛋白實(shí)驗(yàn)組均能明顯降低大鼠血清補(bǔ)體水平、肺組織MPO含量和BALF中細(xì)胞數(shù)、TNF-α和P-selectin含量,減輕肺組織炎癥反應(yīng);但對肺含水量和BALF中蛋白含量的影響無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)論:LPS激活血清補(bǔ)體可損傷內(nèi)皮細(xì)胞,導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞顯著表達(dá)粘附分子以及發(fā)生凋亡。香椿果抗補(bǔ)體活性多酚雖能強(qiáng)烈抑制補(bǔ)體經(jīng)典途徑和替代途徑激活,但對LPS激活補(bǔ)體損傷內(nèi)皮細(xì)胞沒有保護(hù)作用。采用兩種不同類