高桿氣生根水稻變異株系AFLP分析.pdf

1、通過遠緣分子雜交技術,將玉米DNA片段直接導入受體水稻細胞,獲得了大量的變異材料。本實驗選取2種具有玉米性狀的(高桿、氣生根)水稻變異株系HN-28和HN-31作為研究材料,利用AFLP分子標記技術對其基因組DNA進行多態(tài)性分析,將篩選出的目的帶和新增帶回收、克隆和測序,對得到的序列進行分析,以求在分子水平上為遠緣分子雜交技術提供理論依據(jù),為尋找發(fā)現(xiàn)新的功能基因提供數(shù)據(jù),為水稻優(yōu)良性狀分子輔助標記育種提供依據(jù)。
　　 本實驗選用

2、64對AFLP分子標記選擴引物,對2種水稻變異株系及其對照的基因組DNA進行多態(tài)性分析,篩選出18對最優(yōu)引物組合。DNA指紋圖譜分析發(fā)現(xiàn),玉米DNA導入受體水稻基因組后,受體水稻變異株系基因組DNA多態(tài)性圖譜出現(xiàn)了顯著差異,變異株系HN-28和HN-31分別擴增出差異帶91條和90條,其中新增帶各為49條和31條,缺失帶各為25條和45條,目的帶各為17條和14條,差異比例分別為7.8％和8.2％。計算變異株系與其對照之間的基因組DNA

3、多態(tài)性相似率發(fā)現(xiàn),變異株系HN-28和HN-31與水稻對照的相似率分別為88.2％和90.8％,變異株系與受體水稻之間出現(xiàn)了明顯的差異;變異株系HN-28、HN-31及水稻對照與玉米對照相似率分別為32.5％、30.4％和26.5％,水稻變異株系與玉米的相似性明顯高于對受體水稻與玉米之間的相似性。這說明玉米DNA可能通過遠緣分子雜交技術直接導入到水稻基因組中。
　　 將目的帶序列進行BLAST檢索,結(jié)果顯示,兩條目的帶序列P4M

4、8-HN28和P4M8-HN31均未檢索到匹配的水稻序列和玉米序列,兩條目的帶序列與玉米對照序列之間有16個堿基完全一致,將這16個堿基經(jīng)BLAST檢索,檢索到100％匹配的玉米序列且未檢索到匹配的水稻序列;四條目的帶序列P5M3-HN28、P5M3-HN31、P5M8-HN28和P5M8-HN31與檢索到的水稻序列之間有多處堿基差異,堿基差異率分別為7.3％,7.3％,12.5％和12.5％;兩條目的帶序列P5M7-HN28和P8M5

5、-HN28與檢索到的水稻序列之間有個別堿基差異,堿基差異率分別為0.8％和0.9％。這可能是玉米DNA導入誘導的突變,我們猜測變異性狀的表達可能與堿基突變有關,也可能是水稻基因組中導入了玉米DNA小片段引起的。
　　 對新增帶序列進行BLAST檢索,結(jié)果顯示,三條新增帶序列P3M6-HN28、P3M6-HN31和P5M8-HN31與檢索到的水稻序列之間有個別堿基差異,堿基差異率分別為1.7％,1.5％和1.2％;新增帶序列P4M