高桿氣生根水稻變異株系A(chǔ)FLP分析.pdf

1、通過遠(yuǎn)緣分子雜交技術(shù),將玉米DNA片段直接導(dǎo)入受體水稻細(xì)胞,獲得了大量的變異材料。本實(shí)驗(yàn)選取2種具有玉米性狀的(高桿、氣生根)水稻變異株系HN-28和HN-31作為研究材料,利用AFLP分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)其基因組DNA進(jìn)行多態(tài)性分析,將篩選出的目的帶和新增帶回收、克隆和測序,對(duì)得到的序列進(jìn)行分析,以求在分子水平上為遠(yuǎn)緣分子雜交技術(shù)提供理論依據(jù),為尋找發(fā)現(xiàn)新的功能基因提供數(shù)據(jù),為水稻優(yōu)良性狀分子輔助標(biāo)記育種提供依據(jù)。
　　 本實(shí)驗(yàn)選用

2、64對(duì)AFLP分子標(biāo)記選擴(kuò)引物,對(duì)2種水稻變異株系及其對(duì)照的基因組DNA進(jìn)行多態(tài)性分析,篩選出18對(duì)最優(yōu)引物組合。DNA指紋圖譜分析發(fā)現(xiàn),玉米DNA導(dǎo)入受體水稻基因組后,受體水稻變異株系基因組DNA多態(tài)性圖譜出現(xiàn)了顯著差異,變異株系HN-28和HN-31分別擴(kuò)增出差異帶91條和90條,其中新增帶各為49條和31條,缺失帶各為25條和45條,目的帶各為17條和14條,差異比例分別為7.8％和8.2％。計(jì)算變異株系與其對(duì)照之間的基因組DNA

3、多態(tài)性相似率發(fā)現(xiàn),變異株系HN-28和HN-31與水稻對(duì)照的相似率分別為88.2％和90.8％,變異株系與受體水稻之間出現(xiàn)了明顯的差異;變異株系HN-28、HN-31及水稻對(duì)照與玉米對(duì)照相似率分別為32.5％、30.4％和26.5％,水稻變異株系與玉米的相似性明顯高于對(duì)受體水稻與玉米之間的相似性。這說明玉米DNA可能通過遠(yuǎn)緣分子雜交技術(shù)直接導(dǎo)入到水稻基因組中。
　　 將目的帶序列進(jìn)行BLAST檢索,結(jié)果顯示,兩條目的帶序列P4M

4、8-HN28和P4M8-HN31均未檢索到匹配的水稻序列和玉米序列,兩條目的帶序列與玉米對(duì)照序列之間有16個(gè)堿基完全一致,將這16個(gè)堿基經(jīng)BLAST檢索,檢索到100％匹配的玉米序列且未檢索到匹配的水稻序列;四條目的帶序列P5M3-HN28、P5M3-HN31、P5M8-HN28和P5M8-HN31與檢索到的水稻序列之間有多處堿基差異,堿基差異率分別為7.3％,7.3％,12.5％和12.5％;兩條目的帶序列P5M7-HN28和P8M5

5、-HN28與檢索到的水稻序列之間有個(gè)別堿基差異,堿基差異率分別為0.8％和0.9％。這可能是玉米DNA導(dǎo)入誘導(dǎo)的突變,我們猜測變異性狀的表達(dá)可能與堿基突變有關(guān),也可能是水稻基因組中導(dǎo)入了玉米DNA小片段引起的。
　　 對(duì)新增帶序列進(jìn)行BLAST檢索,結(jié)果顯示,三條新增帶序列P3M6-HN28、P3M6-HN31和P5M8-HN31與檢索到的水稻序列之間有個(gè)別堿基差異,堿基差異率分別為1.7％,1.5％和1.2％;新增帶序列P4M