缺氧條件下核呼吸因子-1對大鼠心肌細胞線粒體功能的影響.pdf

1、目的：
　　為了研究NRF-1基因?qū)Υ笫笮募〖毎℉9c2）線粒體功能代謝的影響，我們建立1％O2+5%CO2的物理缺氧模型，觀察NRF-1基因能否改善大鼠心肌細胞在缺氧條件下的生長狀態(tài)及能量代謝水平，旨在為心力衰竭的基因治療提供一種新的途徑。
　　方法：
　　1.利用第三代慢病毒質(zhì)粒系統(tǒng)構(gòu)建NRF-1過表達細胞株（pCDH-NRF）、干擾細胞株（sh-NRF）和空病毒細胞株(pCDH-vector)。Western

2、blot法及熒光定量PCR法鑒定NRF-1的表達水平。
　　2.分別在5%CO2+95%空氣及1%O2+5%CO2條件下培養(yǎng)三組細胞24h及48h，使用CCK-8法測定三組細胞在缺氧狀態(tài)下細胞活力的變化。
　　3.分別在5%CO2+95%空氣及1%O2+5%CO2條件下培養(yǎng)三組細胞48h，使用流式細胞術(shù)測定線粒體膜電位的變化。
　　4.使用細胞線粒體能量代謝儀檢測各組細胞在正常和缺氧條件下線粒體的耗氧水平。
　　

3、結(jié)果：
　　1.成功構(gòu)建出NRF-1基因過表達慢病毒載體，并且熒光定量PCR結(jié)果顯示，過表達細胞株中NRF-1基因表達水平（4.08±0.3）高于空病毒組細胞株（1.00±0.15），而干擾組細胞株中NRF-1基因表達水平（0.35±0.14）低于空病毒組細胞株（1.00±0.15）；Western Blot結(jié)果顯示，過表達細胞株中NRF-1蛋白表達水平（5.07±0.63）高于空病毒組細胞株（3.15±0.59）與干擾組細胞株（

4、1.66±0.22）。
　　2.在正常條件下培養(yǎng)細胞24h后，NRF-1過表達細胞株、干擾組細胞株及空病毒組細胞株OD值分別為1.4365±0.0223、1.5125±0.0543、1.4087±0.0263；而在1%O2+5%CO2條件下培養(yǎng)細胞24h后，三組細胞株細胞OD值分別為1.4605±0.0413、1.4833±0.1092、1.4365±0.0926，差異變化不明顯。
　　3.在正常條件下培養(yǎng)細胞48h后，NR

5、F-1過表達細胞株、干擾組細胞株及空病毒組細胞株OD值分別為1.8649±0.0132、1.8176±.03964、1.7872±0.0062；而在1%O2+5CO2條件下培養(yǎng)細胞48h后，三組細胞株細胞OD值分別為1.5706±0.0251、1.0781±0.0717、1.4038±0.0375，差異變化顯著，具有統(tǒng)計學意義（p＜0.05）。
　　4.正常條件下NRF-1過表達組細胞，NRF-1干擾組細胞和空病毒組細胞的線粒體膜

6、電位去極化水平分別為3.1%、5.1%、1.2%，而在1%O2+5%CO2缺氧培養(yǎng)細胞后，NRF-1過表達組細胞，NRF-1干擾組細胞和空病毒組細胞線粒體膜電位去極化水平分別為52.7%、28.1%、48.1%，提示NRF-1基因過表達可以降低缺氧對線粒體膜電位的損傷。
　　5.細胞在氯化鈷及缺氧處理后，與空病毒組細胞株相比，NRF-1過表達組細胞株的基礎(chǔ)氧耗水平較高，NRF-1干擾組細胞株的基礎(chǔ)氧耗水平較低。
　　結(jié)論：<