重復(fù)經(jīng)顱磁刺激對(duì)戊四氮致癇大鼠的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究高頻及低頻重復(fù)經(jīng)顱磁刺激對(duì)戊四氮致癇大鼠的影響，觀察磁刺激作用后大鼠癲癇發(fā)作的行為學(xué)變化并探討其可能的機(jī)制。連續(xù)2周為SD大鼠腹腔注射戊四氮以誘發(fā)癲癇，每日在腹腔藥物注射后之后分別采用低頻（0.5Hz）、高頻（10Hz）及假性重復(fù)經(jīng)顱磁刺激對(duì)各組大鼠進(jìn)行重復(fù)經(jīng)顱磁刺激，觀察戊四氮誘導(dǎo)及不同頻率重復(fù)經(jīng)顱磁刺激作用后癲癇發(fā)作情況，通過(guò)蛋白印跡、免疫熒光等方法對(duì)相關(guān)蛋白進(jìn)行檢測(cè)以探索其可能的機(jī)制。
　　方法：將正常雄性SD大鼠

2、隨機(jī)分為四組，分別設(shè)立為為對(duì)照組（Control）、假性磁刺激組（Kindled）、低頻重復(fù)經(jīng)顱磁刺激組（KrLFS）及高頻重復(fù)經(jīng)顱磁刺激組(KrHFS)。其中Kindled組、KrLFS組及KrHFS三組以40mg/kg的劑量給予腹腔注射戊四氮，注射后密切觀察并記錄大鼠有無(wú)癲癇發(fā)作及癲癇發(fā)作情況，觀察時(shí)間為1小時(shí)。經(jīng)過(guò)6小時(shí)恢復(fù)期后KrLFS、KrHFS組分別予以低頻（0.5Hz）及高頻（10Hz）經(jīng)顱磁刺激；假刺激組腹腔注射戊四氮后

3、給以只有相應(yīng)聲音而無(wú)磁場(chǎng)作用的刺激，連續(xù)2周。各組刺激總數(shù)均為1500脈沖。對(duì)照組則在相應(yīng)的時(shí)間予以腹腔注射生理鹽水。儀器采用英國(guó)Magstim Rapid2型號(hào)磁刺激儀，“8”字形線圈，刺激強(qiáng)度設(shè)置為為110％MT，每300個(gè)脈沖刺激之間間隔2min。每日腹腔注射戊四氮對(duì)大鼠行為學(xué)改變進(jìn)行仔細(xì)觀察，尤其是癲癇發(fā)作等級(jí)，發(fā)作潛伏期等進(jìn)行詳細(xì)記錄。末次注射后進(jìn)行詳細(xì)的行為學(xué)觀察記錄，之后將各組大鼠處死后斷頭取腦，采用蛋白印記，實(shí)時(shí)熒光定量

4、PCR及免疫組化、TUNEL檢測(cè)等技術(shù)對(duì)大鼠海馬組織相關(guān)蛋白進(jìn)行檢測(cè)，以期從行為學(xué)和分子生物學(xué)角度探討重復(fù)經(jīng)顱磁刺激對(duì)大鼠癲癇模型的的影響，對(duì)其潛在機(jī)制的進(jìn)行研究。
　　結(jié)果：
　　1.腹腔注射戊四氮后給予低頻重復(fù)經(jīng)顱磁刺激刺激使大鼠致癇時(shí)間及發(fā)作潛伏期較假刺激明顯延長(zhǎng)(P＜0.05)，高頻磁刺激作用組則較對(duì)照組明顯縮短(P＜0.05)。
　　2.低頻磁刺激作用后大鼠海馬組織內(nèi)GABAAR及GAD65表達(dá)水平較假刺激相

5、比明顯提高(P＜0.05)；高頻磁刺激作用后與假刺激作用組相比GABAAR表達(dá)無(wú)明顯差異(P>0.05)但GAD65的表達(dá)在高頻磁刺激組中較假刺激組相比明顯降低（P＜0.05）；NMDAR2A的表達(dá)水平在磁刺激組與假刺激組之間無(wú)明顯差異（P＞0.05)。
　　3.免疫組化結(jié)果提示癲癇發(fā)作（Kindled組）大鼠海馬神經(jīng)元數(shù)量與對(duì)照組相比顯著下降(P＜0.05)，致癇大鼠的低頻磁刺激使神經(jīng)元數(shù)量的減少低于假刺激大鼠（P＜0.05）。

6、Caspase-3及TUNEL檢測(cè)結(jié)果提示低頻磁刺激對(duì)癲癇發(fā)作后海馬神經(jīng)元的凋亡較假刺激相比具有抑制作用(P＜0.05)，GFAP在低頻磁刺激組的表達(dá)下降提示重復(fù)經(jīng)顱磁刺激可能抑制了致癇大鼠的星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖活化。
　　結(jié)論：戊四氮誘導(dǎo)SD大鼠癲癇發(fā)作后，低頻重復(fù)經(jīng)顱磁刺激抑制了癲癇的發(fā)作，高頻重復(fù)經(jīng)顱磁刺激可對(duì)戊四氮點(diǎn)燃的癲癇發(fā)作起到易化作用。而此種作用可能通過(guò)對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮性及抑制性神經(jīng)傳導(dǎo)通路中的某些受體、酶類如NMDA