骨橋蛋白通過MAPK信號通路上調MMP9表達及與胚胎著床相關性分析.pdf

1、目的：研究骨橋蛋白(OPN)在圍著床窗口期的小鼠子宮內膜的變化規(guī)律，探討在人子宮內膜腫瘤細胞RL95-2細胞（用來模擬著床期子宮內膜細胞）中，OPN能否通過某一信號通路促進MMP9的表達，分析在胚胎著床的過程中OPN所發(fā)揮的作用及機制。
　　 方法：(1)提取妊娠第1、2、3、4、5天(D1-D5)的小鼠的子宮內膜上皮組織蛋白和mRNA，用Western blot方法和RT-PCR方法檢測OPN的表達的變化情況。(2)用重組的O

2、PN蛋白加入到無血清無雙抗條件的培養(yǎng)液中刺激RL95-2細胞，用ELISA方法檢測RL95-2細胞MMP9表達的變化情況和相應通路的變化情況。(3)構建攜帶有氨芐抗性表達基因和OPN變異體A（OPN全序列）的質粒，轉染入RL95-2細胞中，檢測轉染后培液中和RL95-2細胞中MMP9的蛋白和mRNA表達情況，分析相應通路的變化情況
　　 結果：(1)妊娠期間小鼠子宮內膜OPN的表達變化明顯，在妊娠D1-4天隨著妊娠天數的增加而增

3、加，在D4天小鼠胚胎著床窗口期表達達到最高峰，D5天表達量開始下降。(2)用OPN重組蛋白刺激RL95-2細胞后，MMP9的表達量明顯增加，并與OPN重組蛋白的加入量有著劑量依賴性，即隨著OPN重組蛋白加入量的增加而增加，并且OPN能夠通過ERK1/2的磷酸化而激活MAPK信號通路促使下游分子MMP9的表達上調，且OPN刺激ERK1/2的磷酸化隨著時間的增加而增加，在刺激1小時后達到最高值，但在2h時既開始下降。(3)OPN質粒構建成功