黃芩苷上調FUT4表達及促進胚胎著床機制的研究.pdf

1、背景與目的:
　　1.糖基化在決定子宮內膜對胚胎的容受能力方面發(fā)揮重要作用。
　　2.巖藻糖基轉移酶Ⅳ(FUT4)在哺乳動物子宮內膜呈階段特異性表達，并被認為是子宮內膜容受性標志物。
　　3.黃芩苷(Baicalin)是從中藥黃芩（Scutellaria Baicalensis）中提取的一種黃酮類單體，具有改善哺乳動物生殖的功能。
　　4.然而，黃芩苷在胚胎與子宮內膜黏附過程中的調節(jié)作用是否與子宮內膜FUT4表達

2、有關目前尚不清楚。
　　5.本研究旨在探討黃芩苷對胚胎黏附和著床的影響及其糖生物學作用機制，進一步揭示黃芩苷對哺乳動物胚胎著床的重要調控作用。
　　方法:
　　1.利用RT-PCR，Western blot和免疫熒光技術檢測黃芩苷對人子宮內膜RL95-2細胞FUT4 mRNA和蛋白表達影響。
　　2.采用Western blot技術檢測正常對照（control）、二甲基亞砜(DMSO)、黃芩苷(baicalin)

3、、Dickkopf1(DKK1)、黃芩苷聯(lián)合DKK1、轉染對照(vector)、β-連環(huán)蛋白干擾(si-β-catenin)、黃芩苷聯(lián)合si-β-catenin等8組Wnt/β-catenin信號通路關鍵分子磷酸化糖原合成激酶3β(p-GSK3β)，GSK3β，β-catenin和特異蛋白5(SP5)表達水平。
　　3.為探究SP5如何調節(jié)FUT4表達，我們應用RT-PCR和Western blot技術檢測sh-SP5，SP1-c

4、DNA及其共轉染對RL95-2細胞FUT4 mRNA和蛋白表達影響。
　　4.利用子宮內膜RL95-2細胞和胚胎JAR細胞共培養(yǎng)建立的體外植入模型，檢測了包括正常對照、DMSO、baicalin(3，6μg/mL)、sh-SP5等15組的胚胎黏附率。
　　5.采用RT-PCR，Western blot和免疫組化技術進一步檢測經(jīng)黃芩苷和黃芩水煎液灌胃處理的昆明小鼠在孕第4天子宮內膜SP5和FUT4 mRNA和蛋白表達情況。

5、r>　　6.孕第8天計算正常對照、生理鹽水、黃芩苷和黃芩水煎液組的小鼠胚胎著床數(shù)。
　　結果:
　　1.黃芩苷促進入子宮內膜細胞FUT4 mRNA和蛋白表達。RT-PCR和Westernblot結果顯示，黃芩苷3μg/mL(P＜0.05)和6μg/mL（P＜0.01）能顯著提高RL95-2細胞FUT4 mRNA和蛋白表達水平;免疫熒光技術檢測結果與RT-PCR和Westernblot一致。
　　2.黃芩苷活化人子宮內膜

6、細胞Wnt/β-catenin/SP5信號通路。Westem blot結果顯示，與正常對照組相比，黃芩苷（6μg/mL）能顯著提高RL95-2細胞p-GSK3β，β-catenin和SP5(P＜0.001)的表達水平;同時，黃芩苷能夠恢復DKK1和β-cateninsiRNA預處理的RL95-2細胞p-GSK3β，β-catenin和SP5的表達水平。
　　3.SP5上調人子宮內膜細胞FUT4 mRNA和蛋白表達水平。RT-PCR

7、和Westernblot結果顯示，與對照組相比，sh-SP5(P＜0.001)、SP1-cDNA(P＜0.01)和共轉染(P＜0.001)組FUT4 mRNA和蛋白表達水平顯著降低。
　　4.黃芩苷通過Wnt/β-catenin/SP5信號通路上調FUT4表達，促進子宮內膜細胞與胚胎細胞的黏附。黏附實驗結果顯示，正常對照、DMSO、sh-control和mock組之間的胚胎黏附率無顯著性差異;與對照組和DMSO組相比，黃芩苷能顯著

8、提高RL95-2細胞的胚胎黏附率;與轉染對照組相比，sh-SP5或SP1-cDNA(P＜0.001)能顯著降低RL95-2細胞的胚胎黏附率;同時，黃芩苷能夠恢復sh-SP5或SP1-cDNA預處理的RL95-2細胞的胚胎黏附率，但仍低于黃芩苷組;黃芩苷顯著增加共轉染組胚胎黏附率;進一步研究表明，黃芩苷能夠顯著反轉FUT4 siRNA導致的低胚胎黏附率。
　　5.黃芩苷促進著床窗口期小鼠子宮內膜SP5及FUT4 mRNA和蛋白表達。

9、RT-PCR和Western blot揭示，與正常對照和生理鹽水組比較，黃芩苷和黃芩水煎液能顯著增加孕第4天小鼠子宮內膜FUT4和SP5 mRNA及蛋白表達水平;同時，免疫組化結果顯示，黃芩水煎液組與正常對照組相比免疫染色較強，與黃芩苷組相比免疫染色較弱。
　　6.黃芩苷提高小鼠妊娠成功率。與正常對照和生理鹽水組比較，黃芩苷(P＜0.01)和黃芩水煎液(P＜0.05)組胚胎著床率顯著增加。
　　結論:
　　1.黃芩苷上