硝普鈉對(duì)高膽固醇血癥兔Oddi括約肌壓力及細(xì)胞凋亡的影響研究.pdf

1、第一部分:硝普鈉對(duì)高膽固醇血癥兔Odd i括約肌壓力的影響
　　 目的:
　　 研究不同濃度的外源性一氧化氮供體硝普鈉對(duì)高膽固醇血癥兔Oddi括約肌壓力的影響。
　　 方法:
　　 新西蘭兔32只，適應(yīng)性飼養(yǎng)2周后測(cè)血清總膽固醇，將血清總膽固醇＞3mmol/L的兔剔除。隨后給予高膽固醇飼料飼養(yǎng)共6周，再次取耳緣靜脈血測(cè)血清總膽固醇，血清總膽固醇＞10mmol/L為達(dá)到高膽固醇血癥標(biāo)準(zhǔn)。將動(dòng)物隨機(jī)分為4組:

2、對(duì)照組，硝普鈉終濃度0.1mmol/L組，硝普鈉終濃度0.5mmol/L組，硝普鈉終濃度1.0mmol/L組，開(kāi)腹切開(kāi)十二指腸，逆行插入測(cè)壓管進(jìn)行Oddi括約肌測(cè)壓，經(jīng)耳緣靜脈滴注不同濃度的硝普鈉溶液，觀(guān)察膽總管內(nèi)壓、Oddi括約肌基礎(chǔ)壓、收縮幅度、收縮頻率的變化。
　　 結(jié)果:
　　 喂養(yǎng)前兔血清總膽固醇為1.61±0.63mmol/L，高膽固醇飲食喂養(yǎng)6周后，血清總膽固醇為14.20±2.76mmol/L。給藥前各組

3、膽總管內(nèi)壓、Oddi括約肌基礎(chǔ)壓、Oddi括約肌收縮幅度、Oddi括約肌收縮頻率無(wú)明顯差異(p＞0.05)，與給藥前相比，0.1 mmol/L、0.5mmol/L、1.0mmol/L的硝普鈉可顯著降低Oddi括約肌基礎(chǔ)壓(p＜0.05)，隨著硝普鈉濃度的升高，Oddi括約肌基礎(chǔ)壓下降越來(lái)越明顯(p＜0.05)，1.0mmol/L的硝普鈉可降低Oddi括約肌收縮幅度(p＜0.05)。
　　 結(jié)論
　　 高膽固醇血癥可誘導(dǎo)兔

4、Oddi括約肌功能障礙形成。
　　 0.1mmol/L、0.5mmol/L、1.0mmol/L的硝普鈉對(duì)高膽固醇血癥兔的膽總管內(nèi)壓無(wú)明顯影響。
　　 0.1mmol/L、0.5mmol/L、1.0mmol/L的硝普鈉可降低高膽固醇血癥兔的Oddi括約肌基礎(chǔ)壓，且具有濃度依賴(lài)性。
　　 0.1mmol/L、0.5mmol/L的硝普鈉對(duì)高膽固醇血癥兔的Oddi括約肌收縮幅度無(wú)明顯影響，1.0mmol/L的硝普鈉可降低

5、高膽固醇血癥兔的Oddi括約肌收縮幅度。0.1 mmol/L、0.5mmol/L、1.0mmol/L的硝普鈉對(duì)高膽固醇血癥兔的Oddi括約肌收縮頻率無(wú)明顯影響。
　　 第二部分:硝普鈉對(duì)高膽固醇血癥兔Oddi括約肌細(xì)胞凋亡的影響
　　 目的:
　　 研究不同濃度的外源性一氧化氮供體硝普鈉對(duì)高膽固醇血癥兔Oddi括約肌細(xì)胞凋亡的影響。
　　 方法:
　　 新西蘭大耳白兔28只，適應(yīng)性飼養(yǎng)2周后測(cè)血清

6、總膽固醇，將血清總膽固醇＞3mmol的兔剔除。隨后給予高膽固醇飼料飼養(yǎng)共8周，再次取耳緣靜脈血測(cè)血清總膽固醇，血清總膽固醇＞10mmol/L為達(dá)到高膽固醇血癥標(biāo)準(zhǔn)。分離培養(yǎng)Oddi括約肌細(xì)胞，用免疫細(xì)胞化學(xué)染色法進(jìn)行鑒定，傳代培養(yǎng)細(xì)胞，選用第3代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，用不同濃度的硝普鈉作用細(xì)胞24小時(shí)，用蘇木素-伊紅染色、原位末端標(biāo)記法測(cè)定其對(duì)括約肌細(xì)胞凋亡的影響。
　　 結(jié)果:
　　 適應(yīng)性飼養(yǎng)過(guò)程中死亡4只，喂養(yǎng)前兔血清總膽

7、固醇為1.65±0.54mmol/L，高膽固醇飲食喂養(yǎng)8周后，血清總膽固醇為29.17±4.66mmol/。Oddi括約肌細(xì)胞分離培養(yǎng)成功，3天傳代一次，平滑肌α-肌動(dòng)蛋白(α-actin)免疫細(xì)胞化學(xué)染色證實(shí)為平滑肌細(xì)胞，蘇木素-伊紅染色顯示與對(duì)照組相比，硝普鈉處理后的Oddi括約肌細(xì)胞出現(xiàn)變圓、體積縮小、染色質(zhì)邊集、核固縮等變化，原位末端標(biāo)記法顯示硝普鈉處理后的Oddi括約肌細(xì)胞收縮變圓，失去正常平滑肌細(xì)胞的長(zhǎng)梭形形態(tài)，呈黃色/棕黃