芍藥甘草湯含藥血清對高膽固醇血癥兔Oddi括約肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度影響的研究.pdf

1、背景:Oddi括約肌(sphincterofoddi，SO)是膽胰腸結(jié)合部最重要的解剖結(jié)構(gòu)，是膽汁排出膽道的唯一門戶，被喻為胰液和膽汁流動的“閘門”。SO由膽總管末端括約肌、胰管末端括約肌、乳頭括約肌三部分環(huán)行平滑肌纖維及縱肌束共四部分組成，S0不屬于腸肌組織，在人胚胎第4周，膽、胰管匯入十二指腸前相互以胚胎間充織連接形成原始壺腹，第6周腸肌形成，第10周間充組織轉(zhuǎn)化成肌組織。研究發(fā)現(xiàn)，SO具有前向收縮的特性，其收縮與十二指腸同步但又互

2、不相干，SO通過該特性調(diào)節(jié)膽胰液分泌和維持膽胰液正常流向，保持膽道無菌環(huán)境，因此SO生理功能與膽道動力學(xué)有密切關(guān)系。SOD（sphincterofOddidysfunction，SOD）是臨床常見病，根據(jù)其病理機(jī)制，SOD分為SO狹窄和SO功能紊亂兩種情況，SO功能紊亂的實質(zhì)為SO的持續(xù)性痙攣。魏經(jīng)國教授已經(jīng)證實高膽固醇血癥可使SO動力發(fā)生改變，高膽固醇血癥能夠誘發(fā)兔SO功能紊亂[1-3]。早在1887年，意大利生理學(xué)家Oddi發(fā)現(xiàn)了S

3、O，并指出部分患者不明原因的腹痛、發(fā)熱或黃疸可能是由于SO病變引起[4]。經(jīng)過國內(nèi)外20余年的研究，發(fā)現(xiàn)Oddi括約肌功能障礙(spincterofOddidysfunction，SOD)是大多數(shù)膽系疾病發(fā)病機(jī)制的主導(dǎo)環(huán)節(jié)和關(guān)鍵的繼發(fā)病理生理改變。
　　 國內(nèi)外對血管平滑肌及胃腸道平滑肌運(yùn)動機(jī)制的研究較多，而對于SO運(yùn)動機(jī)制的研究較少，已有文獻(xiàn)報道芍藥甙可以通過多種途徑舒張胃腸道平滑肌[4]，最近已有研究證實芍藥有效成分芍藥甙對

4、家兔離體SO肌環(huán)同樣具有舒張作用[5]，芍藥甙舒張胃腸道平滑肌機(jī)制為降低細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度，而芍藥甘草湯舒張SO機(jī)制是否與舒張胃腸道平滑肌機(jī)制相同，目前未見相關(guān)報道。為進(jìn)一步研究芍藥甙作用機(jī)制，本實驗采用芍藥甘草湯含藥血清負(fù)載兔SO細(xì)胞，采用激光共聚焦顯微鏡技術(shù)測定細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度，從而在細(xì)胞水平上闡明芍藥甘草湯對高膽固醇血癥兔SO細(xì)胞的作用機(jī)制，從而在一定程度上為臨床芍藥甘草湯治療SOD提供理論依據(jù)。
　　 目的:
　　

5、 1.探討高膽固醇對兔SO細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響;
　　 2.探討芍藥甘草湯含藥血清對高膽固醇血癥兔SO細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響。
　　 方法:
　　 1.純種新西蘭兔16只隨機(jī)分為兩組，對照組（control，eoN）和高膽固醇血癥(hypereholesterolemia，HC)模型組各8只，對照組飼以標(biāo)準(zhǔn)飼料，實驗組飼以標(biāo)準(zhǔn)飼料+膽固醇，共飼八周，誘發(fā)高膽固醇血癥兔
　　 2.純種新西蘭兔24只，隨即

6、分為8組，每組3只，芍藥甘草湯灌胃，2次/天，共三天，末次給藥后分別于5分、15分、30分、45分、60分、90分、120分、180分8個時間點經(jīng)股動脈采血，用高效液相色譜儀測定血清中芍藥甙和甘草酸的濃度，繪制血藥濃度曲線，取最高血藥濃度時間為含藥血清標(biāo)本采血時間。
　　 3.純種新西蘭兔8只，隨機(jī)分為2組，每組4只，對照組，蒸餾水灌胃，2次/天;實驗組，芍藥甘草湯灌胃，2次/天，共三天，兩組末次灌胃后75min股動脈采血，分離

7、血清，稀釋成高、中、低濃度，經(jīng)56℃恒溫水浴30min滅活補(bǔ)體，0.22μm濾膜過濾除菌，放于-20℃凍存?zhèn)溆谩?br>　　 4.取高膽固醇血癥兔SO段，酶消化法獲取SO細(xì)胞，行原代培養(yǎng)，免疫組織化學(xué)法鑒定，F(xiàn)luo-3/AM負(fù)載SO細(xì)胞，使用共聚焦顯微鏡技術(shù)測定細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度。
　　 結(jié)果:
　　 1.高膽固醇血癥組SO細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度較正常組高;
　　 2.芍藥甘草湯含藥血清組高膽固醇血癥兔SO細(xì)胞內(nèi)鈣離