以腫瘤細(xì)胞Racl蛋白為靶點(diǎn)的在黃酸衍生物的設(shè)計(jì)與合成策略研究.pdf

1、目的：
　　選擇放射增敏節(jié)點(diǎn)蛋白R(shí)ac1為研究對(duì)象，通過(guò)分子對(duì)接技術(shù)，研究蒽醌化合物與Rac1蛋白的相互作用模式。并以分子對(duì)接結(jié)果為依據(jù)，指導(dǎo)合成大黃酸衍生物，通過(guò)體外活性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其靶向性，探索靶向Rac1蛋白化合物的設(shè)計(jì)與合成的新策略。
　　方法：
　　(1)采用計(jì)算機(jī)分子對(duì)接軟件AutoDock4.2等軟件，研究蒽醌化合物與Rac1蛋白的結(jié)合模式。
　　(2)以大黃酸為先導(dǎo)化合物，利用有機(jī)合成反應(yīng)，合成大黃酸

2、含氮的脂肪胺和哌嗪類衍生物，利用波譜技術(shù)進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析。
　　(3)通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)、WB實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)大黃酸衍生物對(duì)鼻咽癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、骨肉瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用和對(duì)Rac1蛋白的影響。
　　結(jié)果：
　　(1)大黃酚、大黃素、大黃酸、大黃素甲醚、蘆薈大黃素等五種常見(jiàn)蒽醌化合物與Rac1蛋白兩個(gè)不同活性腔都能有效對(duì)接，大黃酸與Rac1蛋白結(jié)合自由能最低。
　　(2)大黃酸哌嗪衍生物和大黃酸含N的脂肪胺衍生物與Rac

3、1蛋白親和力均高于大黃酸。
　　(3)成功合成出脂肪胺大黃酸衍生物RN-2和哌嗪類大黃酸衍生物RP-3、RP-4，并經(jīng)波譜證實(shí)。
　　(4) MTT實(shí)驗(yàn)表明，大黃酸衍生物RX-1和RN-2對(duì)各種腫瘤細(xì)胞的抑制率較強(qiáng)，IC50值均低于大黃酸;HepG22.15細(xì)胞對(duì)大黃酸及各衍生物的敏感性最高。
　　(5)WB實(shí)驗(yàn)表明，四種大黃酸衍生物作用6種細(xì)胞后，除了卵巢癌SKOV3細(xì)胞外，其余5種細(xì)胞與空白組細(xì)胞相比，Rac1蛋白

4、均高表達(dá);對(duì)于鼻咽癌CNE-1和CNE-2細(xì)胞，RP-4化合物相對(duì)其他化合物對(duì)細(xì)胞的Rac1蛋白表現(xiàn)出較強(qiáng)的激活能力(P＜0.001)。RN-2化合物與空白細(xì)胞比較，對(duì)于肝癌HepG22.15和肺癌A549細(xì)胞具有較強(qiáng)的Rac1蛋白激活能力(P＜0.01)。
　　(6)分子對(duì)接及WB實(shí)驗(yàn)證實(shí)，激活Rac1蛋白的大黃酸衍生物，均與Rac1蛋白活性腔中氨基酸Asn39、Ala59形成氫鍵。
　　結(jié)論：
　　Rac1蛋白可能