抵抗素通過抑制LKB1-AMPK通路介導H9c2心肌細胞肥大.pdf

1、目的：
　　探討抵抗素通過調(diào)控LKB1/AMPK信號通路對H9c2心肌細胞肥大的影響及其可能的分子機制。
　　方法：
　　生長狀態(tài)良好的H9c2心肌細胞，使用含0.1％胎牛血清的DMED高糖培養(yǎng)基饑餓24 h后進行不同干預。實驗分為4組，Con組：對照組；R50組：抵抗素50 ng/mL組；（R50+Me2）組：抵抗素50 ng/mL加二甲雙胍2 mmol/L組；Me2組：二甲雙胍2 mmol/L組。各組分別使用相應誘

2、導劑處理48 h后進行檢測，顯微鏡鏡照相系統(tǒng)拍照后使用Image J軟件分析細胞表面積，細胞裂解后用BCA法測單細胞蛋白含量，流式細胞術檢測細胞周期和細胞凋亡率，實時熒光定量PCR（RT-qPCR）檢測BNF、β-MHC的相對表達量。確定心肌細胞肥大模型建立成功之后，用50 ng/mL抵抗素以30 min，1 h，2 h，4 h，8 h，24 h等不同的時間間隔處理細胞，用Western blot分析p-AMPK、p-LKB1的表達，確

3、定信號蛋白磷酸化水平與時間關系。最后分四組，Con為對照組，R50組和Me2組分別處理2 h，（R50+Me2）組先用二甲雙胍預處理1 h后再抵抗素處理1 h；分別用Western blot分析p-AMPK、AMPK、p-LKB1、LKB1的表達量。
　　結果：
　　抵抗素能顯著增加H9c2心肌細胞表面積、促進蛋白合成量和細胞凋亡，改變細胞周期，并上調(diào)心肌細胞胚胎基因BNF、β-MHC的表達，而二甲雙胍能明顯逆轉以上現(xiàn)象。抵