抵抗素通過(guò)抑制LKB1-AMPK通路介導(dǎo)H9c2心肌細(xì)胞肥大.pdf

1、目的：
　　探討抵抗素通過(guò)調(diào)控LKB1/AMPK信號(hào)通路對(duì)H9c2心肌細(xì)胞肥大的影響及其可能的分子機(jī)制。
　　方法：
　　生長(zhǎng)狀態(tài)良好的H9c2心肌細(xì)胞，使用含0.1％胎牛血清的DMED高糖培養(yǎng)基饑餓24 h后進(jìn)行不同干預(yù)。實(shí)驗(yàn)分為4組，Con組：對(duì)照組；R50組：抵抗素50 ng/mL組；（R50+Me2）組：抵抗素50 ng/mL加二甲雙胍2 mmol/L組；Me2組：二甲雙胍2 mmol/L組。各組分別使用相應(yīng)誘

2、導(dǎo)劑處理48 h后進(jìn)行檢測(cè)，顯微鏡鏡照相系統(tǒng)拍照后使用Image J軟件分析細(xì)胞表面積，細(xì)胞裂解后用BCA法測(cè)單細(xì)胞蛋白含量，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡率，實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-qPCR）檢測(cè)BNF、β-MHC的相對(duì)表達(dá)量。確定心肌細(xì)胞肥大模型建立成功之后，用50 ng/mL抵抗素以30 min，1 h，2 h，4 h，8 h，24 h等不同的時(shí)間間隔處理細(xì)胞，用Western blot分析p-AMPK、p-LKB1的表達(dá)，確

3、定信號(hào)蛋白磷酸化水平與時(shí)間關(guān)系。最后分四組，Con為對(duì)照組，R50組和Me2組分別處理2 h，（R50+Me2）組先用二甲雙胍預(yù)處理1 h后再抵抗素處理1 h；分別用Western blot分析p-AMPK、AMPK、p-LKB1、LKB1的表達(dá)量。
　　結(jié)果：
　　抵抗素能顯著增加H9c2心肌細(xì)胞表面積、促進(jìn)蛋白合成量和細(xì)胞凋亡，改變細(xì)胞周期，并上調(diào)心肌細(xì)胞胚胎基因BNF、β-MHC的表達(dá)，而二甲雙胍能明顯逆轉(zhuǎn)以上現(xiàn)象。抵