肝X受體通過(guò)調(diào)控內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路抑制由缺氧-復(fù)氧誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞凋亡.pdf

1、目的：⑴以H9c2細(xì)胞（大鼠心肌樣細(xì)胞）為研究對(duì)象，體外水平構(gòu)建缺氧復(fù)氧損傷模型，模擬心臟的缺血再灌注損傷。⑵觀察肝X受體激動(dòng)劑T0901317預(yù)處理后心肌缺氧復(fù)氧損傷中細(xì)胞活性及凋亡水平的改變，并測(cè)定內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激水平相關(guān)指標(biāo)的變化。初步闡明肝X受體在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激水平對(duì)H9c2心肌細(xì)胞凋亡等過(guò)程中的作用。
　　方法：①體外培養(yǎng)大鼠H9c2心肌細(xì)胞，進(jìn)行缺氧3h復(fù)氧10h，復(fù)制缺氧復(fù)氧模型。②將H9c2心肌細(xì)胞隨機(jī)分為3組，正常對(duì)照組（

2、Control組）、缺氧/復(fù)氧組(H/R)、T0901317（10μmol/L）預(yù)處理+缺氧/復(fù)氧組。③CCK-8法檢測(cè)各組細(xì)胞存活率，Hoechst33342/PI雙染和Annexin V-FITC流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡情況。④qRT-PCR和Western blot檢測(cè)胞內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激水平蛋白GRP78，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激凋亡蛋白CHOP/GADD153、Caspase-12基因和蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：⑴與Control組相

3、比，H/R組和T0901317預(yù)處理組細(xì)胞存活率均明顯減低(P＜0.01)，但T0901317預(yù)處理組的細(xì)胞存活率較H/R組有所改善，細(xì)胞存活率較H/R組明顯增高(P＜0.01)。⑵Hoechst33342/PI雙染和Annexin V-FITC流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)計(jì)算各組H9c2細(xì)胞凋亡率，與Control組相比，H/R組和T0901317預(yù)處理組細(xì)胞凋亡率明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，但T0901317預(yù)處理組較H/R組

4、相比，凋亡率明顯降低（P＜0.01）。⑶H/R組和T0901317預(yù)處理組H9c2心肌細(xì)胞內(nèi)GRP78、CHOP/GADD153、Caspase-12的mRNA及蛋白表達(dá)水平較Control組均明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);而與H/R組相比，T0901317預(yù)處理組GRP78、CHOP/GADD153、Caspase-12的mRNA及蛋白表達(dá)情況較單純H/R組組明顯下調(diào)，數(shù)據(jù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。
　　結(jié)