柚皮苷通過調(diào)控p38MAPK信號通路保護H9c2心肌細胞對抗阿霉素誘導的損傷.pdf

1、目的：觀察p38MAPK信號通路在阿霉素(doxorubicin，DOX)誘導的H9c2心肌細胞損傷中的作用，探討柚皮苷(naringinx，NRG)是否通過抑制p38MAPK通路對抗阿霉素心肌細胞炎癥反應及細胞毒性。
　　 方法：應用5μmol·L-1 DOX處理H9c2心肌細胞建立DOX心肌細胞損傷模型;細胞主要分組為:正常對照組(Control)，阿霉素組(DOX)，柚皮苷預處理組(NRG+DOX)，N-乙酰半胱氨酸預處理

2、組(NAC+DOX)，SB203580預處理組(SB203580+DOX)，柚皮苷組(NRG)，N-乙酰半胱氨酸組(NAC)，SB203580組(SB203580); CCK-8比色法檢測細胞存活率;Western blot法測定p38MAPK、caspase-3蛋白表達水平;ILISA試劑盒檢測腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-1β（IL-1β）和白細胞介素-6（IL-6）水平;Hochest33258核染色法觀察細胞凋亡的

3、形態(tài)學改變;雙氯熒光素(DCFH-DA)染色熒光顯微鏡照像檢測細胞內(nèi)的活性氧(ROS);羅丹明123(RH123)染色熒光顯微鏡照像檢測線粒體膜電位(MMP)。
　　 結(jié)果：5μmol·L-1 DOX處理24h可誘導H9c2心肌細胞損傷，表現(xiàn)為細胞存活率下降，凋亡細胞增加，TNF-α、IL-1β和IL-6水平明顯升高，活性氧(ROS)生成增多，線粒體膜電位(MMP)丟失;5μmol·L-1 DOX處理可時間依賴性上調(diào)H9c2心肌

4、細胞內(nèi)p-p38MAPK、cleaved caspase-3表達;在5μmol·L-1 DOX處理H9c2心肌細胞前，應用1μmol·L-1 NRG預處理150 min或1000μmol·L-1 NAC預處理60 min均能明顯抑制p-p38MAPK表達;1μmol·L-1 NRG預處理150 min或3μmol·L-1 SB203580預處理60 min均能抑制DOX對H9c2心肌細胞損傷，使細胞存活率增加，凋亡細胞減少，TNF-α、