雙核銅配合物選擇性抑制TCPTP及其細(xì)胞效應(yīng)研究.pdf

1、蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPs)能廣泛影響細(xì)胞增殖、分化、遷移、凋亡及免疫應(yīng)答等過程。許多疾病諸如糖尿病、癌癥、肥胖、類風(fēng)濕和免疫功能紊亂等都與PTPs的異常表達(dá)有關(guān)。有效抑制PTPs的活性能夠提高細(xì)胞磷酸化水平，調(diào)節(jié)細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。T細(xì)胞蛋白酪氨酸磷酸酶(TCPTP)是一種胞內(nèi)非受體型蛋白酪氨酸磷酸酶。由于它在控制炎癥和調(diào)控腫瘤方面的重要作用，近年來，TCPTP抑制劑的研究受到人們的廣泛關(guān)注。研究表明銅配合物具有很強(qiáng)的PTP抑制活性，因此以

2、TCPTP為靶點(diǎn)研究銅配合物的抗癌活性及機(jī)理為開發(fā)新型銅配合物抗癌藥物提供理論依據(jù)。
　　 基于雙核銅配合物[Cu2(μ-IDA)(phen)3(NO3)]NO3·4H2O(phen=1，10-phenanthro line，H2IDA=iminodiacetic acid)(1)能夠有效而且選擇性抑制體外重組TCPTP的實(shí)驗(yàn)結(jié)果[1]，本文進(jìn)一步研究了該配合物對四種腫瘤細(xì)胞內(nèi)TCPTP的抑制活性和選擇性及其對腫瘤細(xì)胞增殖和凋亡

3、的影響，初步建立裸鼠異種移植瘤模型，并且研究了活體水平上該配合物的抗腫瘤活性及對組織內(nèi)TCPTP的抑制活性。主要工作和研究結(jié)果如下:
　　 1、運(yùn)用MTT染色法檢測腫瘤細(xì)胞活力，研究了配合物1對人乳腺癌細(xì)胞(MCF7)、宮頸癌細(xì)胞(HeLa)、肝癌細(xì)胞(HepG2)、腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞(U251)的抑制增殖情況。結(jié)果表明:配合物1對四種腫瘤細(xì)胞均有抑制增殖作用并且呈現(xiàn)時(shí)間和濃度依賴關(guān)系，但是對不同細(xì)胞抑制作用的強(qiáng)弱程度不同。配合物1對

4、HeLa細(xì)胞的抑制增殖效果最強(qiáng)，對U251細(xì)胞的抑制增殖效果最弱。銅離子對四種腫瘤細(xì)胞的抑制增殖效果不明顯，配體對四種腫瘤細(xì)胞有抑制增殖作用但是相同條件下抑制增殖效果明顯弱于配合物。
　　 2、運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)和AnnexinV-PI雙染法研究了配合物1對四種腫瘤細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡能力。結(jié)果表明:配合物1在作用12h后對四種腫瘤細(xì)胞均有誘導(dǎo)凋亡效果且呈現(xiàn)濃度依賴關(guān)系。配合物1對不同腫瘤細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡能力具有選擇性。濃度為10μM的配合

5、物1作用12h后，MCF7細(xì)胞的晚期凋亡比例高達(dá)89.5％，而U251的晚期凋亡比例為49.5％。相同濃度和作用時(shí)間下銅離子和配體對四種腫瘤細(xì)胞基本沒有誘導(dǎo)凋亡效果。
　　 3、運(yùn)用蛋白免疫印跡法檢測配合物1對四種腫瘤細(xì)胞內(nèi)PTPs的抑制活性及選擇性。結(jié)果表明:配合物1能選擇性抑制腫瘤細(xì)胞內(nèi)TCPTP的活性且對不同種細(xì)胞有選擇性。在配合物1濃度達(dá)到10μM作用7h后，MCF7細(xì)胞內(nèi)TCPTP底物的磷酸化水平明顯升高，PTP1B底

6、物的磷酸化水平基本沒有變化。而U251細(xì)胞則在配合物1的濃度達(dá)到5μM時(shí)TCPTP底物的磷酸化水平明顯升高。此外配合物1作用7h后腫瘤細(xì)胞內(nèi)EGFR的表達(dá)量也升高，泛素的表達(dá)量基本沒有變化。說明配合物1可能通過選擇性抑制細(xì)胞內(nèi)的TCPTP進(jìn)而影響細(xì)胞新陳代謝，除作用于TCPTP外配合物還可能作用于EGFR上游靶標(biāo)影響EGFR在細(xì)胞中的表達(dá)。配合物1不通過抑制蛋白酶體抑制細(xì)胞增殖。
　　 4、初步構(gòu)建裸鼠MCF7細(xì)胞異種移植瘤模型