雙核銅配合物選擇性抑制TCPTP及其細胞效應研究.pdf

1、蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPs)能廣泛影響細胞增殖、分化、遷移、凋亡及免疫應答等過程。許多疾病諸如糖尿病、癌癥、肥胖、類風濕和免疫功能紊亂等都與PTPs的異常表達有關。有效抑制PTPs的活性能夠提高細胞磷酸化水平，調(diào)節(jié)細胞信號轉(zhuǎn)導。T細胞蛋白酪氨酸磷酸酶(TCPTP)是一種胞內(nèi)非受體型蛋白酪氨酸磷酸酶。由于它在控制炎癥和調(diào)控腫瘤方面的重要作用，近年來，TCPTP抑制劑的研究受到人們的廣泛關注。研究表明銅配合物具有很強的PTP抑制活性，因此以

2、TCPTP為靶點研究銅配合物的抗癌活性及機理為開發(fā)新型銅配合物抗癌藥物提供理論依據(jù)。
　　 基于雙核銅配合物[Cu2(μ-IDA)(phen)3(NO3)]NO3·4H2O(phen=1，10-phenanthro line，H2IDA=iminodiacetic acid)(1)能夠有效而且選擇性抑制體外重組TCPTP的實驗結果[1]，本文進一步研究了該配合物對四種腫瘤細胞內(nèi)TCPTP的抑制活性和選擇性及其對腫瘤細胞增殖和凋亡

3、的影響，初步建立裸鼠異種移植瘤模型，并且研究了活體水平上該配合物的抗腫瘤活性及對組織內(nèi)TCPTP的抑制活性。主要工作和研究結果如下:
　　 1、運用MTT染色法檢測腫瘤細胞活力，研究了配合物1對人乳腺癌細胞(MCF7)、宮頸癌細胞(HeLa)、肝癌細胞(HepG2)、腦膠質(zhì)瘤細胞(U251)的抑制增殖情況。結果表明:配合物1對四種腫瘤細胞均有抑制增殖作用并且呈現(xiàn)時間和濃度依賴關系，但是對不同細胞抑制作用的強弱程度不同。配合物1對

4、HeLa細胞的抑制增殖效果最強，對U251細胞的抑制增殖效果最弱。銅離子對四種腫瘤細胞的抑制增殖效果不明顯，配體對四種腫瘤細胞有抑制增殖作用但是相同條件下抑制增殖效果明顯弱于配合物。
　　 2、運用流式細胞術和AnnexinV-PI雙染法研究了配合物1對四種腫瘤細胞的誘導凋亡能力。結果表明:配合物1在作用12h后對四種腫瘤細胞均有誘導凋亡效果且呈現(xiàn)濃度依賴關系。配合物1對不同腫瘤細胞的誘導凋亡能力具有選擇性。濃度為10μM的配合

5、物1作用12h后，MCF7細胞的晚期凋亡比例高達89.5％，而U251的晚期凋亡比例為49.5％。相同濃度和作用時間下銅離子和配體對四種腫瘤細胞基本沒有誘導凋亡效果。
　　 3、運用蛋白免疫印跡法檢測配合物1對四種腫瘤細胞內(nèi)PTPs的抑制活性及選擇性。結果表明:配合物1能選擇性抑制腫瘤細胞內(nèi)TCPTP的活性且對不同種細胞有選擇性。在配合物1濃度達到10μM作用7h后，MCF7細胞內(nèi)TCPTP底物的磷酸化水平明顯升高，PTP1B底

6、物的磷酸化水平基本沒有變化。而U251細胞則在配合物1的濃度達到5μM時TCPTP底物的磷酸化水平明顯升高。此外配合物1作用7h后腫瘤細胞內(nèi)EGFR的表達量也升高，泛素的表達量基本沒有變化。說明配合物1可能通過選擇性抑制細胞內(nèi)的TCPTP進而影響細胞新陳代謝，除作用于TCPTP外配合物還可能作用于EGFR上游靶標影響EGFR在細胞中的表達。配合物1不通過抑制蛋白酶體抑制細胞增殖。
　　 4、初步構建裸鼠MCF7細胞異種移植瘤模型