重樓抗腫瘤活性及中藥對氟尿嘧啶類藥物療效相關分子調(diào)節(jié)作用的初步研究.pdf

1、[目的]研究重樓乙醇提取物(Paris polyphlla ethanol extract，PPE)對ICR小鼠的急性毒性劑量，探討重樓在腫瘤綜合治療中的應用，并考察其體外的抗腫瘤作用及機制;探討胃癌患者的術前血清腫瘤標記物水平和手術后脈管內(nèi)癌栓之間的關系，初步探討胃癌臨床應用中藥聯(lián)合氟尿嘧啶類化療的療效及其對療效相關分子調(diào)節(jié)作用。
　　[方法]1、用ICR小鼠進行急性毒性實驗，以生存狀態(tài)、血液學指標變化、腹腔臟器變化為觀察指標，

2、并計算PPE的半數(shù)致死量(median leath death，LD50)劑量。2、用MTT法及細胞克隆形成方法檢測PPE，以及PPE聯(lián)合放療對人胃癌細胞MKN-45的生長抑制;用PI染色法檢測PPE，以及PPE聯(lián)合放療對人胃癌細胞株MKN-45細胞周期的影響;Western-blot檢測PPE對凋亡相關蛋白水平的影響;運用RT-PCR法檢測PPE對氟尿嘧啶類藥物敏感基因胸苷酸合成酶(thymidylate synthase，TS)的m

3、RNA水平的變化。3、通過對我院普通外科進行胃癌根治性手術的1005例患者，檢測手術前一周內(nèi)的外周血腫瘤標志物CEA、CA19-9、CA242、CA72-4、CA125的水平，并對術后標本進行包括脈管癌栓在內(nèi)的多項病理學檢查。入組患者基線水平數(shù)據(jù)按照各外周血腫瘤標志物的狀況被分組，分析每個亞組標志物水平對脈管癌栓狀態(tài)的影響。評價各亞組腫瘤標志物水平預測脈管癌栓的敏感性、特異性、陽性預測價值、陰性預測價值;追蹤胃癌根治術Ⅲ期的輔助化療患者

4、共270名，化療前后患者均進行外周血TS mRNA檢測。將入組患者分成中藥結(jié)合化療和單純化療組。入組患者每月檢測外周血腫瘤標志物CEA、CA19-9、CA242、CA72-4、CA125的水平，每三月復查影像學評價病情進展。比較兩組患者的外周血腫瘤學標志物變化情況，1年內(nèi)無復發(fā)生存率，以及化療前后外周血TS mRNA水平變化。
　　[結(jié)果]1、單次給藥后獲得PPE對ICR小鼠的LD50值約為:12mg/ml，給藥劑量越接近LD50

5、值的小鼠，其白細胞較正常小鼠組明顯下降，紅細胞及血小板無明顯變化，藥物對小鼠臟器未見明顯毒性作用。2、PPE對人胃癌細胞MKN-45的抑制率呈時間和劑量依賴性;重樓聯(lián)合放療可以降低腫瘤細胞的生存率;重樓醇提物單獨作用將MKN-45細胞阻滯在S期，而與放療聯(lián)合細胞周期阻滯在G2/M期;凋亡分析顯示PPE可以誘導腫瘤細胞凋亡，同時PPE與放療以協(xié)同作用方式誘導腫瘤細胞凋亡。PPE可下調(diào)Bcl-2蛋白的表達及上調(diào)Bax蛋白的表達。PPE可下調(diào)

6、TS mRNA水平，在MKN-45細胞系中下調(diào)至0.59±0.07倍。3、入組的1005名患者中共有540名(53.73％)患者發(fā)現(xiàn)術后存在血管內(nèi)癌栓。對于至少有一項外周血腫瘤標志物升高的患者來說，其脈管癌栓發(fā)生危險性是沒有腫瘤標志物升高患者的2.9倍。對于至少有四項外周血腫瘤標志物升高的患者，對比沒有腫瘤標志物升高的患者，其脈管癌栓發(fā)生風險是其16.4倍;輔助化療聯(lián)合中藥治療組與單純輔助化療組比較，6周期輔助化療后外周血腫瘤標志物較化

7、療前上升超過20％者分別有27名(19.3％)及34名（26.2％，P=0.178）;1年內(nèi)病情復發(fā)的患者分別有31名(22.1％)及43名(33.1％，P=0.044);兩組間化療前外周血TS mRNA表達水平無顯著差異（聯(lián)合組:1.31，化療組:1.28，P=0.93），6周期化療后單純化療組患者外周血TS mRNA表達平均水平較化療前上升（1.28，1.42，P=0.43），化療聯(lián)合中藥治療組患者外周血TS mRNA表達平均水平較

8、化療前下降(1.31，0.98，P=0.12)，但均未達到統(tǒng)計學顯著性差異。
　　[結(jié)論]1、PPE具有毒性，可能是通過血液白細胞的變化所致，對于腹腔臟器沒有明顯影響，臨床應用需關注血液學檢測指標。2、PPE具有顯著的體外抗腫瘤作用，其抗腫瘤作用的機理可能與影響細胞周期，下調(diào)Bcl-2蛋白的表達及上調(diào)Bax蛋白的表達來誘導腫瘤細胞凋亡，下調(diào)TS基因表達水平提高化療藥物敏感性等作用有關;PPE與放療結(jié)合可以阻滯細胞周期，誘導腫瘤細胞