KK-42對凡納濱對蝦熱激蛋白基因表達的影響.pdf

1、熱激蛋白(Heat Stress Protein,HSP)是一種在細胞中普遍存在并具有高度保守性的蛋白,在動物適應環(huán)境、提高其耐受性、實現(xiàn)自我保護和損傷修復的過程中都發(fā)揮重要作用。KK-42是一種咪唑類保幼激素拮抗物。我們的前期研究已經(jīng)證明,使用KK-42處理凡納濱對蝦(Litopenaeus vannamei)蝦苗,可以顯著提高其成活率,但是對于KK-42提高凡納濱對蝦成活率的機理仍不了解。鑒于HSP70和HSP90在生物環(huán)境適應性和

2、自我保護方面的重要作用,我們以凡納濱對蝦為材料,研究了KK-42對上述兩種基因表達的影響。
　　 實驗采用浸潤法,用1.95×10-4M的KK-42對凡納濱對蝦幼蝦(體長3.5-5.0cm)進行處理,浸潤時間為1min,然后按正常方法飼養(yǎng)。實驗過程中定期采樣,解剖取其眼柄、肝胰腺、大顎器官、肌肉等組織,提取各組織器官中總RNA并進行反轉錄,研究了HSP90和HSP70的組織分布,采用RACE技術從其肝胰腺中克隆出凡納濱對蝦HSP

3、90的cDNA全長序列,并對其進行序列分析,后進行熒光實時定量PCR,對肝胰腺中HSP90和HSP70的時空表達進行檢測并研究了KK-42對其基因轉錄的影響。
　　 凡納濱對蝦HSP90基因的cDNA全長2543個堿基,該基因5'-端非翻譯區(qū)(5'-UTR)長105bp,3'-端非翻譯區(qū)(3'-UTR)長278bp,開放閱讀框(ORF)2160bp,編碼720個氨基酸,預測其蛋白質分子量為82.8kD,理論等電點分別為6.65。

4、其C端具有保守的EEVD結構,證明其為一種細胞質HSP,多序列比對結果顯示凡納濱對蝦HSP90的氨基酸推導序列與中國明對蝦(Fenneropenaeus chinensis)和刀額新對蝦(Metapenaeusensis)的同源性高達97.80％和97.22％。
　　 組織半定量結果顯示,hsp90和hsp70在凡納濱對蝦大顎器官、眼柄、肌肉和肝胰腺中都有表達,其中,肝胰腺中的表達水平較高。熒光實時定量結果顯示,實驗期間,肝胰腺