KK-42對(duì)凡納濱對(duì)蝦熱激蛋白基因表達(dá)的影響.pdf

1、熱激蛋白(Heat Stress Protein,HSP)是一種在細(xì)胞中普遍存在并具有高度保守性的蛋白,在動(dòng)物適應(yīng)環(huán)境、提高其耐受性、實(shí)現(xiàn)自我保護(hù)和損傷修復(fù)的過(guò)程中都發(fā)揮重要作用。KK-42是一種咪唑類(lèi)保幼激素拮抗物。我們的前期研究已經(jīng)證明,使用KK-42處理凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeus vannamei)蝦苗,可以顯著提高其成活率,但是對(duì)于KK-42提高凡納濱對(duì)蝦成活率的機(jī)理仍不了解。鑒于HSP70和HSP90在生物環(huán)境適應(yīng)性和

2、自我保護(hù)方面的重要作用,我們以凡納濱對(duì)蝦為材料,研究了KK-42對(duì)上述兩種基因表達(dá)的影響。
　　 實(shí)驗(yàn)采用浸潤(rùn)法,用1.95×10-4M的KK-42對(duì)凡納濱對(duì)蝦幼蝦(體長(zhǎng)3.5-5.0cm)進(jìn)行處理,浸潤(rùn)時(shí)間為1min,然后按正常方法飼養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中定期采樣,解剖取其眼柄、肝胰腺、大顎器官、肌肉等組織,提取各組織器官中總RNA并進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄,研究了HSP90和HSP70的組織分布,采用RACE技術(shù)從其肝胰腺中克隆出凡納濱對(duì)蝦HSP

3、90的cDNA全長(zhǎng)序列,并對(duì)其進(jìn)行序列分析,后進(jìn)行熒光實(shí)時(shí)定量PCR,對(duì)肝胰腺中HSP90和HSP70的時(shí)空表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)并研究了KK-42對(duì)其基因轉(zhuǎn)錄的影響。
　　 凡納濱對(duì)蝦HSP90基因的cDNA全長(zhǎng)2543個(gè)堿基,該基因5'-端非翻譯區(qū)(5'-UTR)長(zhǎng)105bp,3'-端非翻譯區(qū)(3'-UTR)長(zhǎng)278bp,開(kāi)放閱讀框(ORF)2160bp,編碼720個(gè)氨基酸,預(yù)測(cè)其蛋白質(zhì)分子量為82.8kD,理論等電點(diǎn)分別為6.65。

4、其C端具有保守的EEVD結(jié)構(gòu),證明其為一種細(xì)胞質(zhì)HSP,多序列比對(duì)結(jié)果顯示凡納濱對(duì)蝦HSP90的氨基酸推導(dǎo)序列與中國(guó)明對(duì)蝦(Fenneropenaeus chinensis)和刀額新對(duì)蝦(Metapenaeusensis)的同源性高達(dá)97.80％和97.22％。
　　 組織半定量結(jié)果顯示,hsp90和hsp70在凡納濱對(duì)蝦大顎器官、眼柄、肌肉和肝胰腺中都有表達(dá),其中,肝胰腺中的表達(dá)水平較高。熒光實(shí)時(shí)定量結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)期間,肝胰腺