轉(zhuǎn)基因油菜轉(zhuǎn)化事件特異性檢測技術(shù).pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩120頁未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、根據(jù)我國法律,未經(jīng)安全評價(jià)的油菜產(chǎn)品不容許進(jìn)口和在我國種植。進(jìn)入產(chǎn)業(yè)化的轉(zhuǎn)基因品種需要建立檢測和監(jiān)測方法。2004年,我國允許拜耳公司研發(fā)的6個(gè)轉(zhuǎn)基因油菜品種(MS1×RF1、MS1×RF2、MS8×RF3、OXY235、Topas19/2和T45)和孟山都公司研發(fā)的1個(gè)轉(zhuǎn)基因油菜品種RT73(GT73)作為加工原料進(jìn)口。對轉(zhuǎn)基因油菜及其產(chǎn)品進(jìn)行檢測和監(jiān)測是實(shí)施轉(zhuǎn)基因油菜安全管理的關(guān)鍵。隨著轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的定量標(biāo)識(shí)制度出臺(tái),轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品定性、

2、定量檢測方法的研究顯得十分迫切和重要。本實(shí)驗(yàn)以德國拜耳公司培育的6個(gè)轉(zhuǎn)基因品種(MS1×RF1、MS1×RF2、MS8×RF3、OXY235、Topas19/2和T45)為實(shí)驗(yàn)材料,采用基因組步移法研究了轉(zhuǎn)基因油菜品系MS1、RF1、RF2、MS8、RF3、OXY235、Topas19/2和T45的外源基因插入位點(diǎn)序列特征,并根據(jù)插入DNA與基因組DNA的融合序列信息建立了MS1、RF1、RF2、MS8、RF3、OXY235、Topas

3、19/2和T45轉(zhuǎn)化事件特異性定性、定量檢測方法。并且對每個(gè)檢測體系的特異性、靈敏度、重復(fù)性、準(zhǔn)確性及可靠性進(jìn)行了驗(yàn)證。 1.MS1右邊界(5'端)旁側(cè)序列片段大小為1165bp,特異性引物MS1RG/MS1RV擴(kuò)增片段大小為141bp,檢測靈敏度為2.5個(gè)拷貝(0.013%),建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線決定系數(shù)R2值為0.995,LOD(limitofdetection)和LOQ(limitofquantification)分別為2.5個(gè)

4、拷貝和25個(gè)拷貝。 2.RF1左右邊界(3'和5'端)旁側(cè)序列片段大小分別為1592bp、3192bp,定性引物RF1RG/RF1RV和RF1LG-F/RF1LV-R擴(kuò)增片段大小為99bp、284bp,檢測靈敏度均為5個(gè)拷貝(0.013%),定量引物RF1RG/RF1RV和RF1LG/RF1LV擴(kuò)增片段大小為99bp、117bp,建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線決定系數(shù)R2值分別為0.996和0.988,LOD值均為5個(gè)拷貝;LOQ為25個(gè)拷貝。

5、 3.RF2右邊界(5'端)旁側(cè)序列片段大小為2978bp,特異性引物對RF2RG/RF2RV擴(kuò)增片段大小為138bp,檢測靈敏度為5個(gè)拷貝(0.013%),建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線決定系數(shù)R2值為0.998,LOD和LOQ分別為5個(gè)拷貝和25個(gè)拷貝。 4.MS8右邊界(3'端)旁側(cè)序列片段大小為907bp,特異性引物Ms8RG/Ms8RV擴(kuò)增片段大小為123bp,檢測靈敏度為2.5個(gè)拷貝(0.013%),建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線決定系數(shù)R

6、2值為0.991,LOD和LOQ分別為20個(gè)拷貝和25個(gè)拷貝。 5.RF3右邊界(3'端)旁側(cè)序列片段大小為694bp,特異性引物Rf3RG/Rf3RV擴(kuò)增片段大小為92bp,檢測靈敏度為50個(gè)拷貝(0.13%),建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線決定系數(shù)R2值為0.995,LOD和LOQ分別為20個(gè)拷貝和25個(gè)拷貝。 6.OXY235左右邊界(5'和3'端)旁側(cè)序列片段大小分別為923bp、1109bp,特異引物OXYLG/OXYLV和O

7、XYRG/OXYRV擴(kuò)增片斷大小發(fā)分別為105bp,124bp,檢測靈敏度分別是100個(gè)拷貝(0.13%)和10個(gè)拷貝(0.013%)。建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線決定系數(shù)R2分別為1.000和0.998,LOD值均為10個(gè)拷貝或接近10個(gè)拷貝;LOQ值均為50個(gè)拷貝。 7.Topas19/2左邊界(3'端)旁側(cè)序列片段大小為823bp,特異性引物TOPLG/TOPLV擴(kuò)增片段大小為110bp,檢測靈敏度為10個(gè)拷貝(0.013%),建立的標(biāo)

8、準(zhǔn)曲線決定系數(shù)R2值為0.995,LOD和LOQ分別為5個(gè)拷貝和50個(gè)拷貝。 8.T45左右邊界(3'端和5'端)旁側(cè)序列片段大小分別為2154bp、1616bp,根據(jù)分離的左右邊界(3'端和5'端)設(shè)計(jì)特異引物T45LG/T45LV和T45RG/T45RV,擴(kuò)增片斷大小分別為107bp,117bp。用根據(jù)右邊界(5'端)設(shè)計(jì)的引物對T45RG/T45RV擴(kuò)增低拷貝模板時(shí),熒光信號(hào)迅速衰減。選用引物對T45LG/T45LV建立定

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論