維拉帕米預防兔膝關(guān)節(jié)術(shù)后粘連的療效及機制研究.pdf

1、目的:
　　膝關(guān)節(jié)術(shù)后出現(xiàn)的結(jié)締組織纖維帶與鄰近組織或器官的粘連是臨床常遇見的并發(fā)癥，可抑制膝關(guān)節(jié)術(shù)后的運動范圍，降低手術(shù)預期。維拉帕米(Verapamil)——罌粟堿的衍生物，是一種鈣通道阻滯劑，目前臨床被廣泛應用于治療高血壓、心絞痛、心律失常、腦血管病和肺動脈高壓等，同時，也有近來報道將其應用于治療燒傷后的瘢痕疙瘩及預防術(shù)后的瘢痕形成，效果顯著。本課題擬通過制備兔膝關(guān)節(jié)滑膜切除模型，局部應用維拉帕米干預后觀察其預防術(shù)后粘連的效

2、果，并探討其作用機制。
　　方法:
　　選擇健康成年新西蘭白兔45只，隨機分為1mg/m1維拉帕米治療組（A組）、2.5mg/ml維拉帕米治療組（B組）、5mg/ml維拉帕米治療組（C組）、空水醇溶液對照組（D組）、單純手術(shù)組（E組），每組9只。三組動物均在無菌條件下行右膝關(guān)節(jié)大部分滑膜切除術(shù)，并以咬骨鉗將髕上囊區(qū)域咬噬粗糙。其中A、B、C組造模完畢后以不同濃度維拉帕米溶液藥棉覆蓋，術(shù)畢無菌生理鹽水沖洗后逐層縫合，包扎后以管

3、型石膏將兔右膝關(guān)節(jié)固定于屈曲140°位，為時4周，對側(cè)膝關(guān)節(jié)不行任何處理，D組造模完畢后以空水醇溶液藥棉覆蓋，E組不行藥棉覆蓋。于術(shù)后4w對每組兔子進行在恒定伸膝外力作用下測量膝關(guān)節(jié)活動角度的方法對所有動物的膝關(guān)節(jié)活動角度進行測量;4周后處死動物并取材:取3只動物經(jīng)原手術(shù)切口進入觀察關(guān)節(jié)內(nèi)部粘連情況并做記分評價;取3只動物行髕上囊處粘連組織提取，行羥脯氨酸含量檢測，并以實時定量PCR技術(shù)(Quantitativereal-time PC

4、R, RTPCR)對局部瘢痕組織中炎性因子的表達情況進行檢測;取3只動物將右膝關(guān)節(jié)完整取下并行脫鈣處理后，以蘇木精-伊紅染色(hematoxylin-eosin staining，HE染色)、馬松三染（Masson，s trichrome）和免疫組織化學染色觀察損傷局部組織瘢痕粘連情況和波動蛋白表達情況。
　　結(jié)果:
　　所有動物無感染、無死亡、無明顯不良反應。造模后4w各組動物活動角度比較: C組膝關(guān)節(jié)活動角度明顯高于A、

5、B、D和E組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);B組膝關(guān)節(jié)活動角度高于A、D、E組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);A、D、E組膝關(guān)節(jié)活動角度無明顯差異(P＞0.05)。4周后，取每組3只動物做肉眼觀察并做雙盲評估，B、C組明顯優(yōu)于A、D、E組，C組優(yōu)于B組。羥脯氨酸檢測試劑盒結(jié)果表明:A組37.95±4.88μg/mg、B組25.29±5.91μg/mg、C組23.15±4.27μg/mg、D組43.95±5.19μg/mg、E組4

6、4.62±5.53μg/mg，其中A組、B組、C組較對照組（E組）比較均有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，D組較E組比較無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)，A、B、C三組組間比較有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。組織切片經(jīng)HE染色和馬松三染后于光鏡下觀察可見:D、E組有濃厚且致密的纖維性組織形成，與周圍組織粘連廣泛，A、B組可見稀疏的纖維瘢痕形成，其范圍較小，與周圍組織粘連亦較少，C組纖維瘢痕組織形成最少，且稀疏，與周圍組織未見明顯粘連。組織切片經(jīng)波

7、形蛋白(Vimentin)免疫組化染色并行光密度半定量結(jié)果表明:A組32.77±18.93、B組21.91±19.87、C組17.43±22.81、D組45.89±24.32、E組47.21±23.97，其中A組、B組、C組較對照組（E組）比較均有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，D組較E組比較無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)，A、B、C三組組間比較有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。每組白兔的膝關(guān)節(jié)瘢痕粘連組織經(jīng)RTPCR檢測白介素（interleu

8、kin，IL）6，轉(zhuǎn)化生長因子(Transforming GrowthFactor，TGF)β的表達水平情況:A組0.53±0.08和0.61±0.14、B組0.17±0.07和0.35±0.12、C組0.09±0.05和0.25±0.10、D組0.94±0.05和0.89±0.09，其中A組、B組、C組較對照組（E組）比較均有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，D組較E組比較無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)，A、B、C三組組間比較有統(tǒng)計學差異(P

9、＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　通過兔膝關(guān)節(jié)滑膜切除術(shù)后維拉帕米干預，檢測用藥組和對照組間的各指標，包括膝關(guān)節(jié)活動度觀察、粘連肉眼觀察、羥脯氨酸含量、光鏡下粘連情況、波形蛋白表達情況以及炎性因子表達情況，這些指標的結(jié)果表明局部應用維拉帕米可以通過抑制局部成纖維細胞增殖、膠原蛋白表達和炎癥反應，從而抑制關(guān)節(jié)粘連的形成，且呈一定的濃度依賴關(guān)系。在本研究中，維拉帕米在膝關(guān)節(jié)術(shù)后的抗粘連、抗炎、抗瘢痕形成功效的體現(xiàn)有利于膝關(guān)節(jié)術(shù)后的