維拉帕米預(yù)防兔膝關(guān)節(jié)術(shù)后粘連的療效及機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　膝關(guān)節(jié)術(shù)后出現(xiàn)的結(jié)締組織纖維帶與鄰近組織或器官的粘連是臨床常遇見的并發(fā)癥，可抑制膝關(guān)節(jié)術(shù)后的運(yùn)動(dòng)范圍，降低手術(shù)預(yù)期。維拉帕米(Verapamil)——罌粟堿的衍生物，是一種鈣通道阻滯劑，目前臨床被廣泛應(yīng)用于治療高血壓、心絞痛、心律失常、腦血管病和肺動(dòng)脈高壓等，同時(shí)，也有近來報(bào)道將其應(yīng)用于治療燒傷后的瘢痕疙瘩及預(yù)防術(shù)后的瘢痕形成，效果顯著。本課題擬通過制備兔膝關(guān)節(jié)滑膜切除模型，局部應(yīng)用維拉帕米干預(yù)后觀察其預(yù)防術(shù)后粘連的效

2、果，并探討其作用機(jī)制。
　　方法:
　　選擇健康成年新西蘭白兔45只，隨機(jī)分為1mg/m1維拉帕米治療組（A組）、2.5mg/ml維拉帕米治療組（B組）、5mg/ml維拉帕米治療組（C組）、空水醇溶液對(duì)照組（D組）、單純手術(shù)組（E組），每組9只。三組動(dòng)物均在無菌條件下行右膝關(guān)節(jié)大部分滑膜切除術(shù)，并以咬骨鉗將髕上囊區(qū)域咬噬粗糙。其中A、B、C組造模完畢后以不同濃度維拉帕米溶液藥棉覆蓋，術(shù)畢無菌生理鹽水沖洗后逐層縫合，包扎后以管

3、型石膏將兔右膝關(guān)節(jié)固定于屈曲140°位，為時(shí)4周，對(duì)側(cè)膝關(guān)節(jié)不行任何處理，D組造模完畢后以空水醇溶液藥棉覆蓋，E組不行藥棉覆蓋。于術(shù)后4w對(duì)每組兔子進(jìn)行在恒定伸膝外力作用下測量膝關(guān)節(jié)活動(dòng)角度的方法對(duì)所有動(dòng)物的膝關(guān)節(jié)活動(dòng)角度進(jìn)行測量;4周后處死動(dòng)物并取材:取3只動(dòng)物經(jīng)原手術(shù)切口進(jìn)入觀察關(guān)節(jié)內(nèi)部粘連情況并做記分評(píng)價(jià);取3只動(dòng)物行髕上囊處粘連組織提取，行羥脯氨酸含量檢測，并以實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)(Quantitativereal-time PC

4、R, RTPCR)對(duì)局部瘢痕組織中炎性因子的表達(dá)情況進(jìn)行檢測;取3只動(dòng)物將右膝關(guān)節(jié)完整取下并行脫鈣處理后，以蘇木精-伊紅染色(hematoxylin-eosin staining，HE染色)、馬松三染（Masson，s trichrome）和免疫組織化學(xué)染色觀察損傷局部組織瘢痕粘連情況和波動(dòng)蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　所有動(dòng)物無感染、無死亡、無明顯不良反應(yīng)。造模后4w各組動(dòng)物活動(dòng)角度比較: C組膝關(guān)節(jié)活動(dòng)角度明顯高于A、

5、B、D和E組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);B組膝關(guān)節(jié)活動(dòng)角度高于A、D、E組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);A、D、E組膝關(guān)節(jié)活動(dòng)角度無明顯差異(P＞0.05)。4周后，取每組3只動(dòng)物做肉眼觀察并做雙盲評(píng)估，B、C組明顯優(yōu)于A、D、E組，C組優(yōu)于B組。羥脯氨酸檢測試劑盒結(jié)果表明:A組37.95±4.88μg/mg、B組25.29±5.91μg/mg、C組23.15±4.27μg/mg、D組43.95±5.19μg/mg、E組4

6、4.62±5.53μg/mg，其中A組、B組、C組較對(duì)照組（E組）比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，D組較E組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，A、B、C三組組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。組織切片經(jīng)HE染色和馬松三染后于光鏡下觀察可見:D、E組有濃厚且致密的纖維性組織形成，與周圍組織粘連廣泛，A、B組可見稀疏的纖維瘢痕形成，其范圍較小，與周圍組織粘連亦較少，C組纖維瘢痕組織形成最少，且稀疏，與周圍組織未見明顯粘連。組織切片經(jīng)波

7、形蛋白(Vimentin)免疫組化染色并行光密度半定量結(jié)果表明:A組32.77±18.93、B組21.91±19.87、C組17.43±22.81、D組45.89±24.32、E組47.21±23.97，其中A組、B組、C組較對(duì)照組（E組）比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，D組較E組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，A、B、C三組組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。每組白兔的膝關(guān)節(jié)瘢痕粘連組織經(jīng)RTPCR檢測白介素（interleu

8、kin，IL）6，轉(zhuǎn)化生長因子(Transforming GrowthFactor，TGF)β的表達(dá)水平情況:A組0.53±0.08和0.61±0.14、B組0.17±0.07和0.35±0.12、C組0.09±0.05和0.25±0.10、D組0.94±0.05和0.89±0.09，其中A組、B組、C組較對(duì)照組（E組）比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，D組較E組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，A、B、C三組組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P

9、＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　通過兔膝關(guān)節(jié)滑膜切除術(shù)后維拉帕米干預(yù)，檢測用藥組和對(duì)照組間的各指標(biāo)，包括膝關(guān)節(jié)活動(dòng)度觀察、粘連肉眼觀察、羥脯氨酸含量、光鏡下粘連情況、波形蛋白表達(dá)情況以及炎性因子表達(dá)情況，這些指標(biāo)的結(jié)果表明局部應(yīng)用維拉帕米可以通過抑制局部成纖維細(xì)胞增殖、膠原蛋白表達(dá)和炎癥反應(yīng)，從而抑制關(guān)節(jié)粘連的形成，且呈一定的濃度依賴關(guān)系。在本研究中，維拉帕米在膝關(guān)節(jié)術(shù)后的抗粘連、抗炎、抗瘢痕形成功效的體現(xiàn)有利于膝關(guān)節(jié)術(shù)后的