Reelin缺失對(duì)小鼠小腦皮質(zhì)和血管發(fā)育的影響.pdf

1、血管的發(fā)生和細(xì)胞極性化的產(chǎn)生對(duì)于理解個(gè)體的發(fā)育、疾病的產(chǎn)生具有重要的意義。目前，實(shí)驗(yàn)領(lǐng)域主要研究的是研究小腦表觀上面的發(fā)育，對(duì)于小腦的皮質(zhì)生長(zhǎng)過(guò)程中，由于Reelin蛋白缺失對(duì)血管發(fā)育的影響以及細(xì)胞極性化的產(chǎn)生所做的研究并不十分清楚。Reelin蛋白是在遷移細(xì)胞的過(guò)程中充當(dāng)了終止信號(hào)的作用，這種蛋白對(duì)細(xì)胞片層化和細(xì)胞極性化以及血管的形成起著決定性的關(guān)鍵作用。我們用正常小鼠（WT）與Reeler小鼠的小腦分別進(jìn)行尼氏染色，血管灌注和免疫細(xì)

2、胞化學(xué)的方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，探討Reelin蛋白的缺失對(duì)小腦皮質(zhì)和血管發(fā)育的影響。
　　目的：觀察Reelin基因缺失的Reeler小鼠小腦浦肯野細(xì)胞遷移與極性化的改變以及Reelin基因?qū)π∈笱苌L(zhǎng)的影響；探討Reeler小鼠血管的發(fā)生和細(xì)胞之間的關(guān)系，同時(shí)分析這兩種小鼠浦肯野細(xì)胞極性化的改變和血管發(fā)育方式的不同。
　　方法：應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)，尼氏染色技術(shù)和墨汁灌注技術(shù)標(biāo)記兩種不同小鼠從 E17到 P21小腦內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞的發(fā)

3、育情況，并進(jìn)行形態(tài)學(xué)的觀察，同時(shí)對(duì)Reeler與野生型小鼠小腦皮質(zhì)內(nèi)血管體密度和浦肯野細(xì)胞直徑的大小和角度進(jìn)行測(cè)量與比較。
　　結(jié)果：①Reeler小鼠小腦的皮質(zhì)在發(fā)育過(guò)程中片層化發(fā)生了紊亂，沒(méi)有形成正常的三層分層結(jié)構(gòu)：外顆粒層（分子層），浦肯野細(xì)胞層，內(nèi)顆粒層。②浦肯野細(xì)胞在遷移過(guò)程中細(xì)胞極性發(fā)生了改變，通過(guò)對(duì)小腦浦肯野細(xì)胞直徑的大小和細(xì)胞角度改變的測(cè)量，發(fā)現(xiàn)不同的小鼠細(xì)胞極性發(fā)生了明顯的不同，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P<0.05③墨

4、汁灌注的方法顯示兩種小鼠小腦內(nèi)血管的體密度都呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢(shì)，根據(jù)發(fā)育過(guò)程中血管體密度變化的相關(guān)性分析可知：P3和P7時(shí)Reeler小鼠血管體密度與WT小鼠相比P<0.05；P14和P21時(shí)，Reeler小鼠血管體密度與WT小鼠相比P<0.01，顯示出發(fā)育過(guò)程中血管的體密度與年齡有關(guān)，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。另外觀察不同小鼠血管的外觀也有很大的差異。
　　結(jié)論：在小腦發(fā)育過(guò)程中缺少Reelin蛋白的Reeler小鼠皮質(zhì)片層化發(fā)生紊

5、亂，神經(jīng)細(xì)胞極性發(fā)生改變，血管排列紊亂，體密度與相同年齡點(diǎn)的野生小鼠相比增大，Reelin蛋白在小腦皮質(zhì)片層化發(fā)育生長(zhǎng)的過(guò)程中發(fā)揮了至關(guān)重要的作用，一方面控制了皮層神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的改變，并推進(jìn)了哺乳動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育的規(guī)律模式，形成了小腦發(fā)育的不同結(jié)構(gòu)；Reelin也是一種支架蛋白，它的作用是調(diào)節(jié)放射狀膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)排列，為提供了細(xì)胞的正確遷移方向以及可以使血管能正常發(fā)育。提示 Reelin蛋白的突變對(duì)細(xì)胞的發(fā)育造成了損傷，從而使皮質(zhì)片層