甌柑和胡柚果實黃酮類化合物組分鑒定、分離純化及生物活性研究.pdf

1、本論文以甌柑(Citrus reticulata cv.Suavissima）和胡柚(Citrus changshanensis）果實為材料，研究了果實不同部位黃酮類化合物的組分及含量，分離純化了主要黃酮類化合物，并對果實提取物進行了抗氧化、抗腫瘤和抗糖尿病活性評價。主要結(jié)果如下:
　　 1、從甌柑果實中鑒定出八種黃酮類化合物，包括四種黃烷酮糖苷（柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、枸橘苷）和四種多甲氧基黃酮(PMFs)（甜橙黃酮、川陳皮

2、素、橘皮素和5-去甲川陳皮素）。從胡柚果實中鑒定出十種黃酮類化合物，包括六種黃烷酮糖苷（圣草次苷、新圣草次苷、柚皮蕓香苷、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷）和四種PMFs（六甲氧基黃酮、川陳皮素、七甲氧基黃酮和橘皮素）。分析了甌柑和胡柚果實四個不同部位的黃酮類化合物組成，黃烷酮在甌柑和胡柚果實四個部位中均能檢測到，而PMFs僅存在于果實油胞層中;白皮層中黃酮類化合物含量最高，其中新橙皮苷是甌柑果實的主要黃酮類物質(zhì)，而柚皮苷和新橙皮苷是胡柚果實黃

3、酮的主要組分。抗氧化分析表明，甌柑和胡柚四個部位粗提物均有一定抗氧化活性，其中油胞層具有最強的DPPH自由基清除活性;在甌柑和胡柚果實貯藏期間(6℃，120 d)，黃酮類化合物在四個不同部位的組成變化不一，然而總黃酮類化合物維持在較高的水平。
　　 2、采用大孔樹脂和高速逆流色譜(HSCCC)聯(lián)用技術(shù)，建立了從甌柑和胡柚白皮層快速有效分離純化新橙皮苷和柚皮苷的體系。經(jīng)過D101樹脂一步純化之后，新橙皮苷的純度從4.70％增加至3

4、2.38％，柚皮苷的純度從3.92％增加至38.07％;經(jīng)過HSCCC兩相溶劑體系氯仿-甲醇-正丁醇-水(4∶3∶1∶2，v/v)進一步純化后得到的新橙皮苷和柚皮苷純度均在97％以上。利用溶劑萃取、SephadexLH-20凝膠過濾和HSCCC聯(lián)用技術(shù)，建立了從甌柑油胞層分離純化三種黃烷酮（柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷）和四種PMFs（甜橙黃酮、川陳皮素、橘皮素和5-去甲川陳皮素）的體系。所有純化產(chǎn)物經(jīng)過HPLC和LC-MS進行鑒定確認。<

5、br>　　 3、對甌柑和胡柚果實四個部位提取物開展抗腫瘤活性研究，結(jié)果表明甌柑油胞層提取物對人肝癌細胞HepG2，白血病HL-60細胞和乳腺癌MDA-MB-231細胞均有顯著的抑制增殖作用，胡柚提取物和甌柑其他三個部位提取物的抗腫瘤活性不顯著。進一步研究發(fā)現(xiàn)，甌柑油胞層中的甜橙黃酮、川陳皮素，橘皮素和5-去甲川陳皮素對三種腫瘤細胞具有明顯的抑制增殖作用，表明PMFs可能是甌柑油胞層抗腫瘤的重要組分;兩種黃烷酮苷元，即柚皮素和橙皮素也表

6、現(xiàn)出顯著的抑制腫瘤細胞增殖作用，表明柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷等黃烷酮糖苷的代謝產(chǎn)物可能在體內(nèi)發(fā)揮抑制腫瘤活性;此外，劃痕修復(fù)實驗結(jié)果顯示，川陳皮素和橘皮素還具有抑制人卵巢癌SKOV3細胞遷移的作用。
　　 4、對甌柑和胡柚果實四個部位提取物開展抗糖尿病活性研究，結(jié)果表明胡柚果實四個部位提取物均具有促進人肝癌細胞HepG2葡萄糖消耗的作用，而甌柑提取物該活性不顯著。進一步研究表明，胡柚果實中的柚皮苷和新橙皮苷均能促進HepG2細胞

7、葡萄糖消耗，其效果類似降糖藥二甲雙胍，同時柚皮苷和新橙皮苷兩者合用對葡萄糖消耗具有協(xié)同作用。Western blot結(jié)果表明，柚皮苷和新橙皮苷的降糖作用和p-AMPK蛋白激活有關(guān)。此外，柚皮素和橙皮素均能促進HepG2細胞葡萄糖消耗，且具有顯著的抑制α-葡萄糖苷酶活性，表明柚皮苷，新橙皮苷等黃烷酮糖苷的代謝產(chǎn)物可能在體內(nèi)發(fā)揮抗糖尿病活性。
　　 本實驗結(jié)果表明甌柑和胡柚果實富含黃酮類化合物，甌柑果實具有抑制腫瘤細胞增殖的活性，胡