白骨壤果實(shí)中黃酮類化合物的提取、分離純化及抗氧化活性研究.pdf

1、白骨壤(Avicennia marina),是紅樹(shù)林的主要先鋒樹(shù)種,主要分布于廣東、廣西、福建、海南、臺(tái)灣、香港、澳門等地,生長(zhǎng)林地面積超過(guò)7000 hm2。全國(guó)白骨壤果實(shí)年產(chǎn)量達(dá)2萬(wàn)噸以上,其中湛江地區(qū)約9000噸/年,資源豐富,但目前尚未合理開(kāi)發(fā)利用。國(guó)內(nèi)外對(duì)于白骨壤植物資源的研究主要集中在其樹(shù)枝、樹(shù)葉、樹(shù)根等的活性成分,而果實(shí)方面研究尚少；前期研究發(fā)現(xiàn)白骨壤果實(shí)中含有較多的黃酬類化合物,亟待開(kāi)發(fā)。本文以采自湛江的白骨壤果實(shí)為原料,

2、研究果實(shí)中黃酮化合物的提取、分離、純化工藝,并利用體外實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其抗氧化活性,以期為白骨壤資源的保護(hù)和綜合利用提供理論依據(jù)。
　　 研究的主要內(nèi)容與結(jié)果如下:
　　 1、以黃酮提取率為指標(biāo),采用加熱回流法,研究水、95％乙醇、甲醇、丙酮、正丁醇、乙酸乙酯、石油醚等七種不同極性溶劑對(duì)白骨壤果實(shí)的提取效果,結(jié)果表明水、甲醇和95％乙醇提取液中可溶性成分和總黃酮含量較高。綜合考慮,選取乙醇-水作為提取溶劑。然后通過(guò)單因素試驗(yàn)和響

3、應(yīng)曲面法優(yōu)化了白骨壤果實(shí)總黃酮的提取工藝,探討溶劑濃度、料液比、溫度和時(shí)間四個(gè)因素對(duì)提取率的影響,得到乙醇-水浸提工藝的最佳條件為提取溫度55℃、提取時(shí)間3.5h、乙醇濃度66％、料液比1:22(m/V),總黃酮提取率可達(dá)8.613％,制備的白骨壤果實(shí)粗黃酮(AFC)中黃酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為17.39％。
　　 2、通過(guò)比較10種大孔吸附樹(shù)脂對(duì)白骨壤果實(shí)黃酮的吸附和解吸能力,確定AB-8大孔吸附樹(shù)脂為最佳；通過(guò)靜態(tài)試驗(yàn)和動(dòng)態(tài)試驗(yàn),確定

4、了AB-8樹(shù)脂分離純化白骨壤果實(shí)粗黃酮的最適條件:柱子規(guī)格1.6cm×40cm,填料徑高比1:22.5,柱體積72 mL；吸附質(zhì)溶劑:水,吸附質(zhì)溶劑pH:4.65,洗脫劑:80％乙醇,洗脫劑pH:6.51,上樣濃度:3mg/mL,上樣速度:1.5mL/min,上樣量:7.5個(gè)柱體積,洗脫速度:2mL/min,洗脫量:2個(gè)柱體積。分離得到的白骨壤果實(shí)黃酮精制品(AFP)中黃酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為88.67％,純化倍數(shù)為5.1倍。
　　 采

5、用Sephadex LH-20型葡聚糖凝膠將精制的黃酮化合物進(jìn)一步分離得到F1、F2、F3、F4、F5共五個(gè)組分。通過(guò)紫外光譜、顏色鑒別反應(yīng)和HPLC進(jìn)行初步定性分析,結(jié)果表明F1、F2、F3、F4四個(gè)組分為黃酮類化合物,F5為C3-OH氫被取代的黃酮醇類化合物,這五個(gè)組分并非單一化合物,而是結(jié)構(gòu)類似的一類黃酮化合物。
　　 3、以清除率為指標(biāo),研究七種不同溶劑的提取液、粗黃酮、精制品和五個(gè)組分對(duì)DPPH自由基、羥基自由基及超氧

6、陰離子自由基的抗氧化活性。結(jié)果表明,除石油醚以外的六種溶劑的提取液對(duì)DPPH自由基的清除活性均高于對(duì)羥基自由基和超氧陰離子自由基的清除活性,極性較弱的溶劑丙酮、正丁醇、乙酸乙酯、石油醚提取液對(duì)羥基自由基的清除能力強(qiáng)于對(duì)超氧陰離子自由基的清除能力；強(qiáng)極性的水、甲醇及95％乙醇提取物的總抗氧化能力明顯高于其他溶劑的提取物。AFP對(duì)三種自由基的清除效果均高于AFC,組分F5對(duì)三種自由基的清除能力均最低；AFC、AFP及五個(gè)組分對(duì)DPPH及超氧