重組FGF21對(duì)高脂誘導(dǎo)apoE KO病變小鼠的影響.pdf

1、目的：
　　 1．鑒于FGF-21在生命代謝方面發(fā)揮的積極的作用，建立高脂動(dòng)物模型，在動(dòng)物水平，檢測(cè)FGF-21作用的高脂飲食誘導(dǎo)ApoE-KO小鼠相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)情況。
　　 2．給予血管內(nèi)皮細(xì)胞不同濃度FGF-21及不同作用時(shí)間，在細(xì)胞水平檢測(cè)相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)情況。
　　 3．探討FGF-21在高脂引起的動(dòng)脈粥樣硬化病變中的作用。
　　 方法：
　　 取8周齡C57BL/6jWT和ApoE

2、-KO小鼠，分為abcd四組，每組8只，其中a組為C57BL/6jWT小鼠，bcd三組全是ApoE-KO小鼠。a組給予正常飲食，bcd三組給予高脂飲食，喂養(yǎng)2周后四組小鼠統(tǒng)一給予正常飲食，ab兩組皮下注射生理鹽水，cd兩組分別給予100ug/kg和400ug/kg的FGF-21.給藥六周并每周稱取小鼠體重，觀察體重變化，六周后處死老鼠，取肝臟組織、主動(dòng)脈和分離小鼠血清，肝臟組織提取蛋白、甘油三酯、總RNA,切片。用WesternBlot

3、，熒光定量PCR，免疫組化等方法檢測(cè)肝臟組織和細(xì)胞因子表達(dá)及病變：血清檢測(cè)LDL，HDL，Triglyceride，NEFA等指標(biāo)含量。
　　 細(xì)胞水平上，給予HUVEC細(xì)胞25μg/mlox-LDL，25μg/mlox-LDL+100ng/mlFGF-2112h，觀察GRP-78的表達(dá)，給予HUVEC細(xì)胞25ng/ml和100ng/ml，分別檢測(cè)10分鐘和20分鐘時(shí)p-p38和p-gsk表達(dá)情況，給予Huvec細(xì)胞12.5ng

4、/ml，25ng/ml，50ng/ml，100ng/ml，200ng/ml濃度的FGF-21，作用12小時(shí)后提取總蛋白，檢測(cè)p-p38和p-gsk蛋白表達(dá)情況，給予HUVEC細(xì)胞200ng/ml濃度的FGF-21，分別作用5，10，20，30，60，120分鐘，檢測(cè)p-p38，p-GSK,XBP-1，GRP-78，p-ERK,p-JNK表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：FGF-21作用的高脂飲食小鼠組肝臟中p-p38，p-GSK，p-JN

5、K,ACC1，ACC2，HMGR,TGF-β，iNOS，TNF-α基因的表達(dá)下調(diào)，ADIPONECTIN，XBP-1，GRP-78，ApoD基因表達(dá)上調(diào)；血清中中甘油三脂、低密度脂蛋白、游離脂肪酸的含量降低，高密度脂蛋白含量增加；肝臟中甘油三脂含量降低，糖元堆積程度低；小鼠的體重和肝重增長速度受到限制。
　　 100ng/mlFGF-21作用于25μg/mlox-LDL刺激的HUVEC12h后GRP-78的表達(dá)量降低；200ng

6、/ml的FGF-21在作用HUVEC12hp-p38和p-GSK表達(dá)量降低；200ng/ml的FGF-21作用于HUVEC后p-p38的表達(dá)在前30min呈逐步升高趨勢(shì)，而后表達(dá)降低，p-GSK的表達(dá)在200ng/mlFGF-21作用30min后表達(dá)呈下降趨勢(shì)，并且這種低表達(dá)狀態(tài)可以持續(xù)較長時(shí)間。200ng/ml的FGF-21作用于HUVEC后，XBP-1的表達(dá)呈現(xiàn)明顯的升高趨勢(shì)，p-ERK在前60min表達(dá)增加而后開始降低。