肝內(nèi)Treg-Th17平衡在不同階段慢性HBV感染者中的作用.pdf

1、目的：
　　1.分析免疫耐受期慢性乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus, HBV）感染者肝內(nèi)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Regulatory T cell, Treg）水平，探討Treg細(xì)胞是否是導(dǎo)致慢性HBV感染者長期處于免疫耐受狀態(tài)的關(guān)鍵因素，以期能夠?yàn)閷泶蚱泼庖吣褪軤顟B(tài)提供理論基礎(chǔ)。
　　2.分析免疫清除期慢性HBV感染者入院2W時(shí)外周血HBsAg、HBeAg和HBVDNA下降幅度與肝內(nèi) Treg和 Th17細(xì)胞水平之

2、間的關(guān)系，探討肝內(nèi) Treg和Th17細(xì)胞水平對(duì)機(jī)體通過自身的細(xì)胞免疫反應(yīng)清除體內(nèi)HBV能力的影響，為提高機(jī)體自身清除HBV的能力提供理論參考。
　　3.分析不同炎癥和纖維化程度的免疫清除期慢性 HBV感染者肝內(nèi)Treg/Th17平衡變化，探討其平衡變化對(duì)病情進(jìn)展的影響，以期可以為將來通過改變體內(nèi)Treg/Th17平衡狀態(tài)降低患者進(jìn)展為肝衰竭或肝硬化的風(fēng)險(xiǎn)提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：
　　納入我院68例行肝組織活檢的慢性

3、HBV感染者，其中20例處于免疫耐受期，36例處于免疫清除期，12例處于非活動(dòng)期。免疫組織化學(xué)法檢測肝內(nèi)Foxp3+Treg細(xì)胞和 IL-17+Th17細(xì)胞，應(yīng)用電化學(xué)發(fā)光免疫分析法（ Electro chemiluminescence immunoassay, ECLIA）檢測外周血HBsAg、HBeAg水平，應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR法檢測外周血HBV DNA水平。以8例健康供肝者為對(duì)照組。比較各期慢性HBV感染者和健康對(duì)照組肝內(nèi)Treg/

4、Th17平衡的變化，分析免疫清除期慢性HBV感染者入院2W時(shí)外周血HBsAg、HBeAg和HBVDNA下降幅度與肝內(nèi) Treg和 Th17細(xì)胞水平之間關(guān)系，觀察不同炎癥和纖維化程度的免疫清除期慢性HBV感染者肝內(nèi)Treg/Th17平衡變化，分析其與肝臟損傷程度的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　1.與健康對(duì)照組相比，免疫耐受期組和非活動(dòng)期組肝內(nèi)Treg細(xì)胞水平雖有所升高[分別為（1.13±0.21）cells/hpf、（2.44±0.

5、65）cells/hpf、（3.37±1.02）cells/hpf]，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P＞0.05）；免疫清除期組肝內(nèi) Treg細(xì)胞水平[(13.90±5.12)cells/hpf]較其他三組均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01）。
　　而免疫耐受期組和非活動(dòng)期組之間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。而且炎癥程度分級(jí)（G）及纖維化程度分期（S）不同的免疫清除期患者肝內(nèi)Treg細(xì)胞水平存在顯著差異：G4組＞G3組＞

6、G2組[分別為(22.08±0.66)cells/hpf、(16.90±1.47)cells/hpf、(9.85±2.79)cells/hpf]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.001）；S3組＞S2組＞S1組[分別為(21.77±0.97)cells/hpf、(14.64±2.66)cells/hpf、(7.70±1.20)cells/hpf]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.001）。
　　2.免疫清除期患者入院2W時(shí)外周血HBsAg

7、、HBeAg和HBV DNA下降幅度與肝內(nèi)Treg細(xì)胞水平呈顯著負(fù)相關(guān)（均P＜0.001），而與Th17細(xì)胞水平及Treg/Th17比值均無相關(guān)性（均P＞0.05）。
　　3.與健康對(duì)照組相比，免疫耐受期組肝內(nèi)Th17細(xì)胞水平雖有所升高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；免疫清除期組和非活動(dòng)期組肝內(nèi)Th17細(xì)胞水平顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均 P＜0.05）[分別為(1.08±0.18)cells/hpf、(1.98±0.55

8、)cells/hpf、(17.37±1.52)cells/hpf、(3.82±0.67)cells/hpf]；與免疫耐受期組相比，免疫清除期組和非活動(dòng)期組肝內(nèi)Th17細(xì)胞水平顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。免疫清除期組較非活動(dòng)期組肝內(nèi)Th17細(xì)胞水平顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。而且炎癥程度分級(jí)（G）及纖維化程度分期（S）不同的免疫清除期患者肝內(nèi)Th17細(xì)胞水平存在顯著差異：G4組＞G3組＞G2組[分別為(

9、20.12±0.54)cells/hpf、(17.50±1.13)cells/hpf、(16.56±0.92)cells/hpf]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均 P＜0.05）；S3組＞S2組＞S1組[分別為(20.03±0.53)cells/hpf、(17.21±0.80)cells/hpf、(16.08±0.93)cells/hpf]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.001）。
　　4.與健康對(duì)照組相比，免疫耐受期組肝內(nèi)Treg/Th17

10、比值稍有升高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；免疫清除期和非活動(dòng)期組肝內(nèi)Treg/Th17比值降低，前者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），后者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）[分別為(1.06±0.18)、(1.31±0.50)、(0.79±0.24)、(0.88±0.20)]。與免疫耐受期組相比，免疫清除期組和非活動(dòng)期組肝內(nèi)Treg/Th17比值明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01）；免疫清除期組和非活動(dòng)期組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)

11、意義（P＞0.05）。炎癥程度分級(jí)（G）及纖維化程度分期（S）不同的免疫清除期患者肝內(nèi)Treg/Th17比值存在顯著差異：G4組＞G3組＞G2組[分別為(1.10±0.02)、(0.97±0.39)、(0.59±0.15)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）；S3組＞S2組＞S1組[分別為(1.09±0.03)、(0.85±0.15)、(0.48±0.05)]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.001）。
　　結(jié)論：
　　1.與健

12、康對(duì)照組比較，免疫耐受期患者肝內(nèi)Treg和Th17細(xì)胞水平及其平衡狀態(tài)均未見明顯變化，提示慢性HBV感染者長期的免疫耐受狀態(tài)并不是由肝內(nèi)Treg細(xì)胞大量聚集或者Treg/Th17失衡造成的。所以有關(guān)慢性HBV感染者免疫耐受形成的機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。
　　2.免疫清除期患者肝內(nèi)Treg細(xì)胞明顯升高，而且炎癥和纖維化程度越嚴(yán)重，肝內(nèi)Treg細(xì)胞升高越明顯，提示免疫清除期患者肝內(nèi)高水平的Treg細(xì)胞有可能通過抑制機(jī)體過強(qiáng)的免疫反應(yīng)來保

13、護(hù)宿主，避免因過強(qiáng)的免疫反應(yīng)造成嚴(yán)重病理損害；此外，患者入院2W時(shí)外周血HBsAg、HBeAg和HBV DNA下降幅度與肝內(nèi)Treg細(xì)胞水平呈負(fù)相關(guān)，提示免疫清除期患者肝內(nèi)高水平的Treg細(xì)胞可能會(huì)限制機(jī)體通過自身免疫反應(yīng)自發(fā)地清除體內(nèi)HBV的能力，進(jìn)而影響機(jī)體內(nèi)HBV的清除。因此，在控制過強(qiáng)的免疫反應(yīng)對(duì)機(jī)體造成嚴(yán)重?fù)p傷的前提下，適當(dāng)降低免疫清除期患者肝內(nèi)Treg細(xì)胞水平或功能可能會(huì)有利于促進(jìn)機(jī)體對(duì)HBV的清除。
　　3.免疫清除

14、期患者肝內(nèi)Th17細(xì)胞明顯升高，而且炎癥和纖維化程度越嚴(yán)重，肝內(nèi)Th17細(xì)胞升高越明顯，提示Th17細(xì)胞可能介導(dǎo)了慢性HBV感染者肝臟的免疫損傷過程，而且可能還參與了肝纖維化的形成過程。
　　4.不同炎癥和纖維化程度的免疫清除期患者肝內(nèi)Treg/Th17比值存在明顯差異，炎癥和纖維化程度越嚴(yán)重的患者肝內(nèi)Treg/Th17比值越高，提示當(dāng)肝組織損傷程度較輕時(shí)，肝內(nèi)以介導(dǎo)免疫損傷的Th17細(xì)胞升高為主，而當(dāng)肝組織嚴(yán)重?fù)p傷時(shí)，Treg細(xì)