用于生物大分子研究的順磁熒光雙功能探針的設(shè)計(jì)與合成.pdf

1、核磁共振和單分子熒光技術(shù)在研究蛋白質(zhì)動(dòng)態(tài)學(xué)方面具有非常重要的作用。與傳統(tǒng)的核磁共振相比，順磁核磁共振可提供有價(jià)值的長(zhǎng)程結(jié)構(gòu)信息，在解決蛋白質(zhì)的溶液構(gòu)象及動(dòng)態(tài)學(xué)行為，蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用，蛋白質(zhì)-配體相互作用等方面具有明顯的優(yōu)勢(shì)。通常情況下，蛋白質(zhì)中并不含有順磁中心，需要通過化學(xué)修飾的方法將探針引入蛋白質(zhì)，并借此將順磁中心引入到蛋白質(zhì)上。從而借助小分子基團(tuán)及其金屬配合物的磁學(xué)性質(zhì)和光譜特性，獲得大分子蛋白質(zhì)的動(dòng)態(tài)行為、結(jié)構(gòu)變化和作用機(jī)制

2、。
　　本文設(shè)計(jì)合成了一系列TDA、TPMTA、PyQDA為骨架的順磁熒光雙功能探針，這些探針可與蛋白質(zhì)表面的游離巰基通過 Michael加成或親核取代反應(yīng)進(jìn)行共價(jià)連接。發(fā)現(xiàn)了提高4-PhSO2-TPMTA與L-半胱氨酸反應(yīng)活性的方法，為下一步與蛋白質(zhì)的定點(diǎn)修飾提供重要的物理化學(xué)參數(shù)。4-PhSO2-TPMTA與Ubiquitin-G47C連接前后， Ubiquitin-G47C的化學(xué)位移有明顯變化。在Ubiquitin-G47C

3、-TPMTA中逐漸滴加金屬離子（Eu3+和Tb3+），該復(fù)合物在激發(fā)光照射下可產(chǎn)生明顯的金屬離子（Eu3+和 Tb3+）特征熒光發(fā)射峰，且熒光強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)，當(dāng)金屬離子與Ubiquitin-G47C-TPMTA的濃度比為1:1時(shí)，配位達(dá)到飽和，熒光強(qiáng)度不再隨金屬離子濃度的增加而變化。該探針具有較大的金屬離子張量和較強(qiáng)的鑭系金屬離子（Eu3+和 Tb3+）特征熒光，比較適合用于蛋白的溶液構(gòu)象變化和蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)或配體相互作用等方面的研究。核