煙草TMV抗性基因N基因的突變及進化分析.pdf_第1頁
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1、華中農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文煙草TMV抗性基因N基因的突變及進化分析姓名：張亮申請學位級別：碩士專業(yè)：蔬菜學指導教師：匡漢暉201106華中農(nóng)業(yè)大學2011屆碩士研究生學位論文AbstractTheNgeneintobaccoisthefirstclonedplantdiseaseresistancegeneencodingTollinterleukinIreceptor／nucleotideb“mdingsite／leuoinerichr

2、epeat(TIRNBSLRR)domainsItconfersresistancetotobaccomosaicvirus(TMV)bymediatinghypersensitive確嗍㈣attheinfectionsiteA50kDaaminoacid8e虻[utncefromtheCterminalhelicasemotifofTMVrepilicaseW&SenoughtotriggertheHRintobacco#antswi

3、ththeNgeneThep50sequenceoftheTMVwastransformedintoasusceptibletobaccoplant(thehomozygotetransgenicplantiscalledP50inthisstudy)The150plantwascrossedwithaNcontainingtobaccocultivarSamsunNNTherefore，thehybridseedshavebothth

4、eNgeneanditscorrespondingavirulencegenePSOSystemicHROCCURSintheF1seedlingsandtheseedlingsusuallydie12weeksm盯germination0nlywhentheNgeneorp50mutatesandlosesitsfunctionCanthehybridseedlingssurviveInthisstudy，910，000FIseeds

5、derivedfromcrossesbetweenSansunNNandtransgenicP50Ⅵ憾producedandgeminated0nly350seedlingssurvived2weeksaRergerminationhmoculationwithTMVOildetachedleafshowedthat41ofthesesurvivalshadnoHRresponsetoTMV，indicatingthelossofthe

6、NgenefunctionTherefore，theNgenehasalossoffunctionmutationrateofapproximately1／22，000PCRamplificationsusingaseriesofNspecificprimersshowedthat40ofthe41mutantsyieldednoPCRproducts，suggestingdeletionsoftheentireNgeneIncontr

7、asttheothermutanthadPCRproductsusingaUNspecificprimersSequencingthePCRproductsdiscoveredapointmutationwhichcausesaminoacidchangefromF(1008)to“1008)WealsoobtainedNhomologesfromtobaccocultivarHicksbroadleafthroughdatabasem

8、iningandPCRamplificationTheNgenesequencesfromsevengenotypesofNicotianagultinosa，wereobtainedbysequencingPCRproductsamplifiedusingNspecificprimersNosequenceexchangesWCI“ediscoveredbetweentheNgeneanditshomologues，andNgenei

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