TMV抗性基因N介導(dǎo)的煙草過(guò)敏性反應(yīng)及同源基因克隆.pdf

1、分類號(hào)密級(jí)單位代碼：!Q3鰉學(xué)號(hào)：S1QQ21QQ24籃名微雇業(yè)大學(xué)學(xué)位論文TMV抗性基因Ⅳ介導(dǎo)的煙草過(guò)敏性反應(yīng)及同源基因克隆StudiesonhypersensitiveresponsemediatedbyTMVresistancegeneNandcloningofhomologousgenein研究指導(dǎo)Nicotianatabacum教生：謝鴟師：直俊出副麴援申請(qǐng)學(xué)位類別：堡堂亟專業(yè)領(lǐng)域名稱：遺佳堂研所究在方學(xué)向：擅物生堡生絲墨僉王

2、篁塑堂院：生金型堂堂瞳答辯委員會(huì)主席：泵強(qiáng)已眾強(qiáng)巴2。，年～一月叭89iii)l，L2舊幔㈣及■■■I一一WiiiV摘要ILUIHIILLIIILILLHIIIIILIIIlUIY2442798煙草是～種重要的經(jīng)濟(jì)作物。煙草花葉病毒(Tobaccomosaicvirus，TMV)侵染引起的煙草花葉病在我國(guó)發(fā)生極為普遍，嚴(yán)重影響了煙草的產(chǎn)量和質(zhì)量。有效防治TMV的方法是培育抗病品種。因此，探究抗性基因Ⅳ與TMV的相互作用誘導(dǎo)過(guò)敏性反應(yīng)(H

3、ypersensitiveresponse，HR)的影響因素，以及對(duì)其中的抗性基因進(jìn)行克隆和功能鑒定具有重要意義。本實(shí)驗(yàn)以煙草品種NicotianatabacumCVXanthi為材料，研究其在TMV感染下HR誘導(dǎo)的時(shí)間性和溫度敏感性，以及不同濃度TMV接種對(duì)HR誘導(dǎo)和枯斑形成的影響，同時(shí)克隆TMV抗性基因Ⅳ的同源基因，并對(duì)其主要功能區(qū)域進(jìn)行分析。從而為進(jìn)一步理解植物的抗病機(jī)理和煙草抗病毒品種的選育提供理論依據(jù)。主要研究成果如下：1通過(guò)

4、觀察TMV感染含Ⅳ基因煙草(ⅣtabacumCVXanthiNN)與不含Ⅳ基因煙草(ⅣtabacumCVXanthinn)的癥狀表現(xiàn)，結(jié)果顯示，不含Ⅳ基因的煙草Xanthinn在TMV感染后葉片側(cè)脈及支脈組織呈半透明狀，葉片薄厚不勻，呈花葉癥狀。含Ⅳ基因的煙草XanthiNN在TMV感染后出現(xiàn)明顯的HR，形成枯斑，獲得抗性。2通過(guò)對(duì)TMV感染后HR的出現(xiàn)進(jìn)行了監(jiān)測(cè)。結(jié)果表明，TMV接種后36h在感染部位開(kāi)始出現(xiàn)HR，48hHR癥狀明顯，

5、隨著時(shí)間的推移，斑點(diǎn)內(nèi)的細(xì)胞逐漸死亡，形成枯斑。TMV接種一段時(shí)間后，在22。C或28。C時(shí)，煙草葉片出現(xiàn)典型的HR，而在15。C或356C時(shí)，葉片上不出現(xiàn)HR。這些結(jié)果說(shuō)明HR的誘導(dǎo)具有時(shí)問(wèn)性和溫度敏感性。3不同濃度TMV感染對(duì)HR的誘導(dǎo)進(jìn)行了調(diào)查，結(jié)果顯示，用不同濃度TMV提取液接種，無(wú)論TMV提取液濃度的大小，在22。C時(shí)，都是在接種36h后出現(xiàn)HR。而在28。C時(shí)，都是在接種48h后出現(xiàn)HR。這與前面的結(jié)果一致，說(shuō)明TMV濃度對(duì)

6、HR的誘導(dǎo)影響不明顯。4不同濃度TMV感染對(duì)枯斑形成的大小及密度進(jìn)行了研究，結(jié)果顯示，用不同濃度TMV提取液接種，無(wú)論在22。C或28。C下，都對(duì)枯斑的大小有一定的影響，高濃度導(dǎo)致枯斑增大，低濃度下枯斑大小變化不大，而且枯斑密度也與濃度呈一定的相關(guān)性。5根據(jù)已知的煙草Ⅳ基因設(shè)計(jì)特異性引物，通過(guò)RTPCR獲得Ⅳ基因同源基因的cDNA片段(命名為NHl)。序列分析顯示ⅣH，cDNA含2040bp核苷酸，編碼679個(gè)氨基酸。序列同源性比較發(fā)現(xiàn)