左歸丸對腎性骨病調(diào)控因子PTH、CT、CTP27B1的干預(yù)機(jī)制.pdf

1、目的：探討左歸丸對5/6腎大部切除模型并ROD大鼠甲狀旁腺、骨、腎臟多臟腑、多靶點(diǎn)的影響，研究左歸丸防治ROD的作用機(jī)制，探討補(bǔ)腎中藥替代骨化三醇治療SHPT的可行性及理論依據(jù)，為臨床治療CKD并發(fā)ROD的中藥新藥研究提供靶點(diǎn)依據(jù)。
　　 方法： SPF級Wistar大鼠分為6組：正常對照組、假手術(shù)組、左歸丸組、中藥方組、骨化三醇組、模型組(每組n=8)。分別藥物干預(yù)4周、8周、12周，檢測血Cr、BUN、Hb、ALP、iPTH

2、、Ca、P；藥物干預(yù)12周麻醉處死大鼠，雙能X線測量大鼠股骨骨密度(BMD)，檢測PTHmRNA、CTmRNA、CYP27B1mRNA表達(dá)，檢測PTH、CT、CYP27B1蛋白水平，觀察腎臟組織形態(tài)學(xué)改變。
　　 結(jié)果：血Cr，藥物干預(yù)4周時，正常對照組明顯低于各組(P<0.01)，模型組明顯高于各組(P<0.01)；藥物干預(yù)8周時，除假手術(shù)組外，其余各組明顯上升，且明顯高于正常對照組(P<0.01)，骨化三醇組、中藥方組、假手

3、術(shù)組明顯低于模型組(P<0.01)，中藥方組明顯低于左歸丸組、骨化三醇組(P<0.01)(P<0.05)；藥物干預(yù)12周時，除假手術(shù)組外，各組明顯高于正常對照組(P<0.01)，中藥方組明顯低于模型組、骨化三醇組、左歸丸組(P<0.01)(P<0.05)。
　　 血BUN，藥物干預(yù)4周時，除假手術(shù)組外，正常對照組明顯低于各組(P<0.01)，中藥方組、假手術(shù)組明顯低于模型組(P<0.05)(P<0.01)；藥物干預(yù)8周時，正常對

4、照組明顯低于各組(P<0.01)，中藥方組明顯低于左歸丸組、骨化三醇組(P<0.05)；藥物干預(yù)12周時，各組明顯高于正常對照組(P<0.01)(P<0.05)，中藥方組、骨化三醇組明顯低于模型組(P<0.01)(P<0.05)。
　　 Hb，藥物干預(yù)4周時，正常對照組明顯高于各組(P<0.01)，骨化三醇組、假手術(shù)組明顯高于模型組(P<0.01)；藥物干預(yù)8周時，正常對照組明顯高于各組(P<0.01)(P<0.05)，中藥方組

5、明顯高于左歸丸組、骨化三醇組和模型組(P<0.01)(P<0.05)(P<0.01)；藥物干預(yù)12周時，各組明顯低于正常對照組(P<0.01)(P<0.05)，中藥方組明顯高于模型組(P<0.01)。
　　 血清ALP，在藥物干預(yù)4周時，骨化三醇組明顯低于正常對照組(P<0.05)，左歸丸組、骨化三醇組明顯低于中藥方組(P<0.01)；藥物干預(yù)8周時，模型組明顯低于正常對照組(P<0.01)、高于假手術(shù)組(P<0.05)；藥物干

6、預(yù)12周時，模型組明顯高于正常對照組、骨化三醇組、假手術(shù)組(P<0.05)(P<0.01)，左歸丸組明顯高于骨化三醇組(P<0.01)。
　　 iPTH，藥物干預(yù)4周時，模型組、左歸丸組明顯高于正常對照組、假手術(shù)組(P<0.01)(P<0.05)，中藥方組、骨化三醇明顯低于模型組(P<0.05)，中藥方組明顯低于左歸丸組(P<0.01)；藥物干預(yù)8周時，模型組明顯高于中藥方組、左歸丸組、骨化三醇組(P<0.01)；骨化三醇組明顯

7、高于左歸丸組、中藥方組(P<0.01)(P<0.05)；藥物干預(yù)12周時，正常對照組明顯低于各組(P<0.01)，模型組明顯高于各組(P<0.01)。
　　 血清Ca，藥物干預(yù)4周時，中藥方組、假手術(shù)組和左歸丸組明顯高于模型組(P<0.01)和(P<0.05)；藥物干預(yù)8周時，模型組明顯低于假手術(shù)組(P<0.01)，左歸丸組明顯低于模型組、骨化三醇組(P<0.05)(P<0.01)；藥物干預(yù)12周時，模型組明顯高于各組(P<0.

8、01)(P<0.05)。
　　 血清P，藥物干預(yù)4周時，模型組明顯高于各組(P<0.01)；藥物干預(yù)8周時，模型組明顯高于各組(P<0.01)，左歸丸、中藥方組明顯高于骨化三醇組(P<0.01)(P<0.05)；藥物干預(yù)12周時，模型組明顯高于各組(P<0.01)(P<0.05)，中藥方組明顯低于左歸丸組(P<0.01)。
　　 BMD，模型組明顯低于各組(P<0.01)(P<0.05)，中藥方組明顯低于左歸丸組、骨化三

9、醇組(P<0.01)。
　　 PTHmRNA，正常對照組與假手術(shù)組、中藥方組與模型組沒有顯著性差異(P>0.05)，左歸丸組明顯低于骨化三醇組、中藥組、模型組(P<0.01)，骨化三醇組明顯低于中藥組、模型組(P<0.01)。
　　 CTmRNA正常對照組與假手術(shù)組、模型組沒有顯著性差異(P>0.05)，左歸丸組明顯高于各組(P<0.01)，中藥組明顯高于除左歸丸以外的各組(P<0.01)，骨化三醇組明顯低于模型組(P<

10、0.01)。
　　 PTH，各組蛋白表達(dá)明顯高于正常對照組(P<0.01)；中藥方組明顯低于模型組、左歸丸組、骨化三醇組(P<0.01)；左歸丸組明顯低于模型組、骨化三醇組(P<0.05)。
　　 CT，正常對照組的表達(dá)明顯高于各組(P<0.01)；模型組明顯低于中藥方組、骨化三醇組及左歸丸組(P<0.01)；左歸丸組明顯低于中藥方組、骨化三醇組(P<0.01)。蛋白質(zhì)甲狀旁腺PCNA，在正常對照組中表達(dá)最弱，在模型組中

11、表達(dá)最強(qiáng)，且兩組有顯著性差異(P<0.01)；骨化三醇組比中藥方組表達(dá)弱(P<0.01)，左歸丸組比中藥方組、骨化三醇組表達(dá)弱(P<0.01)(P<0.05)。
　　 CYP2781mRNA，假手術(shù)組明顯高于各組(P<0.01)，模型組明顯低于各組(P<0.01)，左歸丸組明顯低于中藥方組、骨化三醇組、模型組(P<0.01)，中藥方組與骨化三醇組沒有顯著性差異(P>0.05)。
　　 CYP27B1蛋白表達(dá)，模型組明顯低

12、于各組(P<0.01)，左歸丸明顯低于中藥方組、骨化三醇組(P<0.01)，中藥方組與骨化三醇組沒有差異(P>0.05)。
　　 CYP27B1免疫熒光結(jié)果：正常對照組、假手術(shù)組表達(dá)強(qiáng)；模型組比各組表達(dá)弱(P<0.05)；中藥方組較左歸丸組、骨化三醇組表達(dá)強(qiáng)(P<0.01)；左歸丸組比骨化三醇組表達(dá)弱(P<0.05)。
　　 結(jié)論：5/6腎大部切除大鼠模型造模成功并發(fā)ROD表現(xiàn)。ROD藥物的干預(yù)應(yīng)從腎功不良初期進(jìn)行，建立

13、預(yù)防模式。左歸丸能改善ROD的骨營養(yǎng)不良，對PTH有直接的抑制作用，其機(jī)制可能是通過調(diào)節(jié)鈣磷代謝及參與成骨細(xì)胞代謝的途徑。左歸丸對甲狀旁腺、甲狀腺、骨有多重作用，可抑制甲狀旁腺的增生，抑制破骨細(xì)胞活性，其對ALP的調(diào)節(jié)作用將預(yù)示在改善骨營養(yǎng)不良方面將比骨化三醇更有優(yōu)勢。
　　 左歸丸和骨化三醇不能有效地控制Cr的升高以及Hb的降低，他們不能有效改善腎功能不良、糾正貧血。在血Cr、BUN、Hb水平控制方面，中藥方組顯示出的明顯優(yōu)勢