SERT對血小板功能的影響及其機制研究.pdf

1、第一部分、SERT抑制劑氟西汀對血小板的作用
　　目的：通過檢測氟西汀對血小板聚集、釋放的影響，確定其對血小板功能的影響。
　　方法：采用血小板聚集檢測儀與流式細胞儀觀察不同濃度的氟西汀對血小板聚集、釋放功能的影響。
　　結(jié)果：氟西汀能顯著性的抑制低劑量膠原誘導(dǎo)的小鼠和人的洗滌血小板聚集，以及低劑量膠原誘導(dǎo)的人PRP聚集，并呈劑量依賴性，但對高劑量膠原誘導(dǎo)的小鼠洗滌血小板以及人富血小板血漿聚集無影響；氟西汀能顯著的抑制

2、膠原刺激的小鼠洗滌血小板P-selectin表達和ATP釋放。
　　結(jié)果如下：①溶媒組、0.1μM、1μM和10μM氟西汀組對低劑量膠原刺激的小鼠洗滌血小板聚集率分別是64.30±7.79％、48.20±8.04%、34.50±6.34%和11.50±13.53%，而對高劑量膠原誘導(dǎo)的小鼠洗滌血小板聚集影響微弱。②溶媒組、0.1μM、1μM和10μM氟西汀組對人洗滌血小板低劑量膠原誘導(dǎo)的聚集率分別為59.57±3.90%、47.1

3、4±6.16%、27.86±5.50%和10.57±3.54%；此外，氟西汀明顯抑制低劑量膠原誘導(dǎo)的人PRP聚集，并不影響高劑量膠原誘導(dǎo)的人PRP聚集。③氟西汀能顯著抑制膠原刺激的血小板P-selectin的表達與ATP釋放。
　　結(jié)論：氟西汀能劑量依賴性地抑制低劑量膠原誘導(dǎo)的血小板聚集，還能顯著地抑制膠原刺激的血小板α顆粒與致密顆粒的釋放。
　　第二部分、氟西汀對血小板內(nèi)信號通路的影響
　　目的：通過檢測氟西汀對小鼠

4、和人血小板內(nèi)信號蛋白分子的磷酸化的影響，分析SERT對血小板功能的影響的機制。
　　方法：洗滌血小板孵育氟西汀后，給予膠原刺激血小板活化，裂解細胞，采用Western Blot技術(shù)檢測Akt（Ser473/474）、GSK3β（S9）和ERK1/2（E4）、p38 MAPK（T180/Y182）的磷酸化表達。
　　結(jié)果：10μM氟西汀能明顯地抑制膠原刺激的Akt（Ser473/474）與其下游GSK3β（S9）磷酸化，對ER

5、K1/2（E4）的磷酸化影響也較強，同時對小鼠的p38 MAPK（T180/Y182）的磷酸化沒有影響，但對人的p38 MAPK卻有輕微抑制作用。
　　結(jié)論：氟西汀可能作用于SERT，從而通過調(diào)控血小板PI3K/Akt信號通路發(fā)揮抑制血小板功能的作用。
　　第三部分、5-HT類似物對血小板及其信號通路的作用
　　目的：通過加入5-HT類似物與5-HT2受體阻斷劑酮色林，檢測小鼠血小板聚集與胞內(nèi)信號蛋白分子的磷酸化水平，

6、確定SERT對血小板功能的影響。
　　方法：洗滌血小板預(yù)孵育氟西汀或酮色林后，再孵育5-HT類似物，給予膠原相關(guān)肽刺激血小板活化，觀察聚集并裂解細胞，采用Western Blot技術(shù)檢測Akt（Ser473/474）、GSK3β（S9）和ERK1/2（E4）、p38 MAPK（T180/Y182）的磷酸化表達。
　　結(jié)果：10μM氟西汀能明顯的抑制膠原相關(guān)肽刺激的血小板聚集和Akt（Ser473/474）與其下游GSK3β（