IL-6跨信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑在對乙酰氨基酚誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷中的作用研究.pdf

1、目的：本課題旨在利用白介素-6（IL-6）跨信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的抑制劑sgp130Fc和激動劑Hyper-IL-6來研究IL-6跨信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑在對乙酰氨基酚（acetaminophen, AAP）誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷中的具體作用。
　　方法：健康 BALB/c雄性小鼠72只，隨機(jī)分4組（A組、B組、C組、D組），A組小鼠腹腔注射0.1mL的PBS，B、C、D組小鼠均按500mg/kg腹腔注射 AAP溶液0.1mL，C組小鼠提前1h腹腔注

2、射0.1mL濃度為10μg/mL的sgp130Fc，D組小鼠提前1h腹腔注射0.1mL濃度為0.5μg/mL的Hyper-IL-6。在注射PBS或AAP溶液24h后小鼠眼球取血做血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）的酶活性檢測和可溶性IL-6受體（soluble IL-6R, sIL-6R）表達(dá)水平的檢測。之后頸椎脫臼處死小鼠，取其肝臟，一份肝臟組織用10％多聚甲醛4℃固定過夜，制作石蠟切片做以下檢測：HE染色方法檢測各組小

3、鼠的肝臟損傷情況；TUNEL染色方法檢測各組小鼠的肝細(xì)胞凋亡情況；PAS染色方法檢測各組小鼠肝臟中糖原的表達(dá)情況；另一份肝臟組織經(jīng)研磨后提取蛋白，用蛋白印跡法（western blot，WB）檢測各組小鼠中的IL-6跨信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的激活標(biāo)志p-STAT3（磷酸化的信號轉(zhuǎn)錄因子3）、增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）、細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Caspase3、血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor， VEG

4、F）及代謝關(guān)鍵酶細(xì)胞色素P4502E1（cytochromeP450，CYP2E1）的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：1.血清 AST、ALT的酶活性：B、C、D組小鼠血清中 AST、ALT的水平顯著高于A組（P<0.05或P<0.01），C組小鼠血清中AST、ALT的水平明顯高于 B組（P<0.05），D組小鼠血清中 AST、ALT的水平明顯低于 B組（P<0.05）。2.血清 sIL-6R的表達(dá)水平：B、C、D組小鼠血清中 sIL-6R

5、的水平均明顯高于A組（P<0.05或P<0.01），C組小鼠血清中sIL-6R的水平明顯低于B組（P<0.05），D組小鼠血清中sIL-6R的水平明顯高于B組（P<0.05）。3. HE染色情況：與B組相比較，C組小鼠肝臟損傷程度加重（P<0.05），而D組小鼠肝臟損傷程度減輕（P<0.05）。4. TUNEL染色情況：A組小鼠中發(fā)生凋亡的肝細(xì)胞很少，B組小鼠中的凋亡肝細(xì)胞數(shù)較A組顯著增多（P<0.01），C組小鼠中的凋亡肝細(xì)胞數(shù)較 B

6、組顯著增多（P<0.05），D組小鼠中的凋亡肝細(xì)胞數(shù)較 B組顯著減少（P<0.05）。5. PAS染色情況：注射 AAP后 B、C、D組小鼠與 A組小鼠相比其肝臟中都出現(xiàn)了糖原含量的減少（P<0.05或 P<0.01），C組小鼠肝臟中糖原的含量較 B組顯著減少（P<0.05），而 D組小鼠肝臟中糖原的含量較B組顯著增多（P<0.05）。6. WB結(jié)果：(1)p-STAT3、PCNA和VEGF的表達(dá)情況：與B組相比較，C組小鼠肝臟中p-S

7、TAT3、PCNA和VEGF的表達(dá)量顯著減少（P<0.05），而D組小鼠肝臟中p-STAT3、PCNA和VEGF的表達(dá)量顯著增多（P<0.05）。(2) Caspase3、CYP2E1的表達(dá)情況：與B組相比較，C組小鼠肝臟中Caspase3、CYP2E1的表達(dá)量顯著增加（P<0.05），而D組小鼠肝臟中Caspase3、CYP2E1的表達(dá)量顯著減少（P<0.05）。
　　結(jié)論：經(jīng)研究表明在AAP誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷中IL-6跨信號