二甲雙胍在IL-6誘導胃癌細胞EMT中的作用.pdf

1、背景：
　　胃癌是目前人類最常見的消化道惡性腫瘤之一，其死亡率占相關腫瘤死亡率的第二位?，F階段胃癌的發(fā)病原因和機制尚未完全清楚，由于早期無較為明顯地癥狀，因此很多病人在前來確診時就已經有局部或遠處的浸潤和轉移，嚴重影響腫瘤患者的治療及預后。上皮間質轉化(epithelial mesenchymal transition，EMT)是一系列生物學過程，是上皮細胞為適應環(huán)境而引發(fā)的，其特征性表現為上皮細胞向間質細胞轉化，在多種惡性腫瘤的

2、侵襲和轉移方面都起著至關重要的作用，尤其是上皮細胞來源的消化道腫瘤方面。因此，對EMT過程進行深入探究,不僅為消化系腫瘤的預防和治療提供方向，也將為消化系腫瘤患者的預后和抗腫瘤藥物的應用提供依據。
　　二甲雙胍是一種臨床上廣泛使用的雙胍類降糖藥物，作為胰島素增敏劑主要針對2型糖尿病的治療。大量研究表明，二甲雙胍通過細胞能量代謝，細胞周期蛋白以及microRNA的調節(jié)能抑制腫瘤細胞的生長。最新的研究進展提示，二甲雙胍能抑制多種惡性腫

3、瘤的EMT進程，從而影響腫瘤進展及預后。本研究通過檢測二甲雙胍對IL-6誘導的胃癌細胞EMT模型的生長，侵襲遷移能力的改變，相關基因的轉錄與表達初步探討二甲雙胍對胃癌細胞EMT的影響。
　　目的：
　　探討雙胍類降糖藥二甲雙胍對IL-6誘導的胃癌細胞SGC7901上皮間質轉化的作用。
　　方法：
　　采用IL-6體外刺激的方法培養(yǎng)SGC7901，構建EMT模型,于倒置顯微鏡下觀察細胞的形態(tài)學變化;根據實驗目的將S

4、GC7901細胞進行分組，可分為SGC7901-ctr組，SGC7901+M組，SGC7901-IL-6組和SGC7901-IL-6+M組；MTT法檢測二甲雙胍對細胞增殖的影響；流式細胞術檢測二甲雙胍對SGC7901細胞周期的影響；細胞劃痕修復實驗檢測二甲雙胍對細胞增殖及遷移的影響，RT-PCR及westernblot檢測EMT相關的重要標志分子E-cadherin，N-cadherin，Vimentin和Twist1在mRNA和蛋白表

5、達水平上的變化情況。
　　結果：
　　1.倒置顯微鏡下觀察各組實驗細胞形態(tài)學差異，IL-6能誘導胃癌細胞SGC-7901發(fā)生一系列形態(tài)學的改變，由典型的上皮細胞樣細胞形態(tài)向間質細胞樣形態(tài)轉化，多數細胞排列較為松散，形態(tài)表現為類似成纖維狀，部分細胞呈梭形，紡錘體形，較之普通SGC7901細胞有典型的形態(tài)學變化。
　　2.MTT法檢測各組實驗細胞增殖能力的變化，二甲雙胍能顯著抑制胃癌細胞SGC7901的增殖促進細胞凋亡，S

6、GC7901-IL-6組較SGC7901-ctr組有明顯地生長增殖優(yōu)勢（P<0.01），而SGC7901-IL-6+M組較之SGC7901-IL-6組又有生長抑制（P<0.01）。
　　3.劃痕修復實驗比較各實驗組細胞遷移能力，在劃痕后24h，SGC7901-IL-6組較之SGC7901-ctr組細胞缺口較??；在劃痕后48h，SGC7901-IL-6組細胞劃痕的缺口已逐漸縮小至接近愈合的狀態(tài)，而對照組劃痕缺口仍比較寬。二甲雙胍處理

7、過的SGC7901-IL-6與未處理組相比細胞缺口增大。流式細胞術檢測各組實驗細胞細胞周期的變化，二甲雙胍能顯著影響胃癌細胞的周期分布且能明顯抑制胃癌細胞的遷移和侵襲能力。
　　4. PCR用于檢測各實驗組細胞EMT相關標志分子mRNA的表達水平，PCR結果顯示，與對照組相比，IL-6處理過的SGC7901細胞E-Cadherin mRNA表達明顯降低，而N-Cadherin、Vimentin和Twist1 mRNA表達明顯增高(

8、P<0.01)。與未受二甲雙胍處理過的IL-6誘導的7901細胞相比，加用二甲雙胍干預的7901(IL-6)細胞E-Cadherin mRNA表達增高，而N-Cadherin、Vimentin和Twist1 mRNA表達降低(P<0.01)。
　　5.Western blot用于檢測各實驗組細胞與EMT相關標志分子的蛋白表達水平，結果表明，與對照組相比，IL-6處理過的SGC7901細胞E-Cadherin蛋白表達量明顯降低，而N

9、-Cadherin、Vimentin和Twist1蛋白表達量明顯增高(P<0.05)。二甲雙胍作用后E-cadherin蛋白表達量增加，而N-cadherin,Vimentin和Twist1蛋白表達量均降低(P<0.05)。
　　結論：
　　1.IL-6能誘導胃癌細胞SGC-7901發(fā)生EMT，使細胞的增殖和遷移能力增強，EMT相關標志分子的表達水平發(fā)生相應變化。
　　2.雙胍類降糖藥二甲雙胍能明顯抑制胃癌細胞 SGC