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1、目的:二甲雙胍是臨床上最常見的口服降糖藥。近年來,研究發(fā)現(xiàn)該藥除了有降糖作用外,還能抑制多種腫瘤細(xì)胞的增殖。二甲雙胍抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用機(jī)制復(fù)雜多樣,且因細(xì)胞種類而異。然而迄今為止,尚未有文獻(xiàn)報(bào)道二甲雙胍對(duì)口腔鱗癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。本研究旨在通過一系列體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn),探討二甲雙胍對(duì)口腔鱗癌細(xì)胞的作用及其相關(guān)機(jī)理。
方法:通過細(xì)胞計(jì)數(shù)的方法檢測(cè)二甲雙胍處理對(duì)口腔鱗癌細(xì)胞數(shù)量的影響;通過細(xì)胞集落形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)二甲雙胍對(duì)口腔鱗癌細(xì)胞體
2、外生長(zhǎng)的抑制作用;通過流式細(xì)胞分析觀察二甲雙胍對(duì)口腔鱗癌細(xì)胞周期及凋亡的影響;通過蛋白免疫印跡的方法檢測(cè)有關(guān)信號(hào)通路上相關(guān)信號(hào)蛋白表達(dá)的變化;通過構(gòu)建口腔鱗癌裸鼠皮下移植瘤模型,并給荷瘤小鼠口服二甲雙胍,觀察其對(duì)口腔鱗癌細(xì)胞的體內(nèi)生長(zhǎng)抑制作用。免疫組織化學(xué)染色及TUNEL染色分別被用于檢測(cè)荷瘤小鼠所荷腫瘤組織石蠟切片中cyclin D1的表達(dá)及細(xì)胞凋亡情況。通過流式細(xì)胞觀察二甲雙胍聯(lián)合化療藥物紫杉醇對(duì)口腔鱗癌細(xì)胞凋亡的作用。
3、結(jié)果:二甲雙胍處理能夠明顯減少口腔鱗癌細(xì)胞CAL27、WSU-HN6和SCC25的細(xì)胞數(shù)及細(xì)胞集落的形成,且這一效應(yīng)隨二甲雙胍劑量的增大和處理時(shí)間的延長(zhǎng)表現(xiàn)更加明顯。流式細(xì)胞分析結(jié)果顯示,二甲雙胍處理能顯著引起口腔鱗癌細(xì)胞周期發(fā)生G0/G1期阻滯。蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)表明,該現(xiàn)象的發(fā)生伴隨AMPK信號(hào)通路的激活及mTOR和S6激酶磷酸化的減少。二甲雙胍還引起相關(guān)周期蛋白如cyclin D1、CDK4、CDK6等表達(dá)下調(diào)和Rb蛋白磷酸化的下降
4、,但不影響細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制因子p21和p27的表達(dá)。此外,二甲雙胍可以明顯誘導(dǎo)口腔鱗癌細(xì)胞發(fā)生凋亡,其機(jī)制可能與二甲雙胍誘導(dǎo)口腔鱗癌細(xì)胞中促凋亡蛋白Bax的表達(dá)和抑制抗凋亡蛋白Bcl-xL和Bcl-2的表達(dá)有關(guān)。裸鼠口腔鱗癌移植瘤模型試驗(yàn)結(jié)果表明,二甲雙胍同樣能通過減少周期蛋白cyclin D1的表達(dá)和誘導(dǎo)口腔鱗癌細(xì)胞凋亡來抑制口腔鱗癌細(xì)胞的體內(nèi)生長(zhǎng)。最后,二甲雙胍聯(lián)合紫杉醇對(duì)口腔鱗癌細(xì)胞凋亡影響的研究表明,二甲雙胍聯(lián)合紫杉醇
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