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文檔簡介
1、目的:二甲雙胍是臨床上最常見的口服降糖藥。近年來,研究發(fā)現(xiàn)該藥除了有降糖作用外,還能抑制多種腫瘤細胞的增殖。二甲雙胍抑制腫瘤細胞生長的作用機制復(fù)雜多樣,且因細胞種類而異。然而迄今為止,尚未有文獻報道二甲雙胍對口腔鱗癌細胞生長的影響。本研究旨在通過一系列體內(nèi)和體外實驗,探討二甲雙胍對口腔鱗癌細胞的作用及其相關(guān)機理。
方法:通過細胞計數(shù)的方法檢測二甲雙胍處理對口腔鱗癌細胞數(shù)量的影響;通過細胞集落形成實驗檢測二甲雙胍對口腔鱗癌細胞體
2、外生長的抑制作用;通過流式細胞分析觀察二甲雙胍對口腔鱗癌細胞周期及凋亡的影響;通過蛋白免疫印跡的方法檢測有關(guān)信號通路上相關(guān)信號蛋白表達的變化;通過構(gòu)建口腔鱗癌裸鼠皮下移植瘤模型,并給荷瘤小鼠口服二甲雙胍,觀察其對口腔鱗癌細胞的體內(nèi)生長抑制作用。免疫組織化學(xué)染色及TUNEL染色分別被用于檢測荷瘤小鼠所荷腫瘤組織石蠟切片中cyclin D1的表達及細胞凋亡情況。通過流式細胞觀察二甲雙胍聯(lián)合化療藥物紫杉醇對口腔鱗癌細胞凋亡的作用。
3、結(jié)果:二甲雙胍處理能夠明顯減少口腔鱗癌細胞CAL27、WSU-HN6和SCC25的細胞數(shù)及細胞集落的形成,且這一效應(yīng)隨二甲雙胍劑量的增大和處理時間的延長表現(xiàn)更加明顯。流式細胞分析結(jié)果顯示,二甲雙胍處理能顯著引起口腔鱗癌細胞周期發(fā)生G0/G1期阻滯。蛋白免疫印跡實驗表明,該現(xiàn)象的發(fā)生伴隨AMPK信號通路的激活及mTOR和S6激酶磷酸化的減少。二甲雙胍還引起相關(guān)周期蛋白如cyclin D1、CDK4、CDK6等表達下調(diào)和Rb蛋白磷酸化的下降
4、,但不影響細胞周期蛋白依賴性激酶抑制因子p21和p27的表達。此外,二甲雙胍可以明顯誘導(dǎo)口腔鱗癌細胞發(fā)生凋亡,其機制可能與二甲雙胍誘導(dǎo)口腔鱗癌細胞中促凋亡蛋白Bax的表達和抑制抗凋亡蛋白Bcl-xL和Bcl-2的表達有關(guān)。裸鼠口腔鱗癌移植瘤模型試驗結(jié)果表明,二甲雙胍同樣能通過減少周期蛋白cyclin D1的表達和誘導(dǎo)口腔鱗癌細胞凋亡來抑制口腔鱗癌細胞的體內(nèi)生長。最后,二甲雙胍聯(lián)合紫杉醇對口腔鱗癌細胞凋亡影響的研究表明,二甲雙胍聯(lián)合紫杉醇
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