黃芩苷對大鼠氣管平滑肌細胞內(nèi)鈣離子濃度的影響.pdf

1、背景:
　　黃芩苷是從黃芩的干燥根中提取分離出來的一種黃酮類化合物，具有多種藥理作用。資料顯示，黃芩苷能舒張大鼠胸主動脈平滑肌和豚鼠的離體腸管平滑肌，其機制與阻斷平滑肌細胞膜上的電壓依賴型鈣通道和受體依賴型鈣通道有關(guān)。也有文獻報道黃芩苷對治療哮喘發(fā)作有一定的療效，具體的機制目前尚不不清楚。本實驗室前期的研究結(jié)果證明黃芩苷通過調(diào)節(jié)cGMP的信號途徑，進而舒張大鼠離體氣管平滑肌。
　　目的:
　　本研究通過探討黃芩苷對大鼠

2、氣管平滑肌細胞內(nèi)鈣離子濃度的影響及相關(guān)機制，對黃芩苷的藥理作用機制作進一步補充，為其臨床應(yīng)用提供相應(yīng)的實驗依據(jù)。
　　方法:
　　大鼠氣管平滑肌細胞的原代培養(yǎng)，隨機分為對照組、黃芩苷組、亞甲基蘭(MB)+黃芩苷組、左旋氮氨酸精氨酸甲酯(L-NAME)+黃芩苷組以及細胞外液無鈣組（對照組與黃芩苷組），采用鈣離子熒光探針Fluo-3/AM標記培養(yǎng)的平滑肌細胞內(nèi)鈣離子，在激光共聚焦顯微鏡下連續(xù)掃描;健康的成年SD大鼠20只，（雌雄

3、不拘）隨機分為對照組、黃芩苷組。頸椎脫臼法處死后迅速分離氣管，黃芩苷組用終濃度8×10-4M黃芩苷的Krebs液37℃液孵育40min，對照組加等同黃芩苷量的PBS液孵育。采用免疫組化法測定誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)的表達，按照一氧化氮合酶檢測試劑盒的方法測NOS的活性。所有數(shù)據(jù)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行分析。
　　結(jié)果:
　　1.黃芩苷組細胞內(nèi)Ca2+熒光強度值在5min和10min后分別是2492.791±5.7

4、30和1689.097±5.202(n=10)與對照組細胞內(nèi)Ca2+熒光強度值5min和10min后3839.368±6.035和3860.163±7.607(n=10)相比明顯降低(P＜0.01)，說明黃芩苷明顯的降低了細胞內(nèi)Ca2+濃度;MB+黃芩苷組細胞內(nèi)Ca2+熒光強度值在5min和10min后分別是3009.596±5.296和3032.298±5.192(n=10)與黃芩昔組相比細胞內(nèi)Ca2+濃度升高說明MB阻斷了黃芩苷促進

5、鳥苷酸環(huán)化酶(GC)減少細胞內(nèi)Ca2+的作用(P＜0.01); L-NAME+黃芩苷組細胞內(nèi)Ca2+熒光強度值在5min和10min后分別是3113.462±6.028和3130.269±6.114(n=10)與黃芩苷組相比細胞內(nèi)Ca2+濃度升高，說明L-NAME抑制了黃芩苷促進NO合成減少細胞內(nèi)Ca2+的作用（P＜0.01）。
　　2.細胞外液無鈣時，對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析，黃芩苷組與對照組相比P＞0.05，無統(tǒng)計學(xué)意義。表明黃芩