白頭翁皂苷A對肺癌細(xì)胞放射敏感性的影響及機(jī)制的研究.pdf

1、目的：研究中藥提取物白頭翁皂苷 A對人非小細(xì)胞肺癌生長及放射敏感性的影響，初步研究相關(guān)作用機(jī)制，探討白頭翁皂苷A作為新型放療增敏劑的可能性。
　　方法：選用人正常支氣管上皮細(xì)胞系Beas-2B、人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549、H1975作為研究對象，采用：
　　(1)四甲基偶氮唑鹽比色法（MTT）檢測白頭翁皂苷 A對人正常支氣管上皮細(xì)胞與人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞生長的影響，并篩選出實(shí)驗(yàn)所用藥物濃度；
　　(2)細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)

2、檢測白頭翁皂苷 A對非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞放射敏感性的影響；
　　(3)流式細(xì)胞術(shù)觀察白頭翁皂苷A對受照射后非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞周期的影響；
　　(4)磷脂酰絲氨酸外翻法（AnnexinⅤ和PI雙染法）檢測白頭翁皂苷A對照射后非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞凋亡的影響；
　　(5)磷酸化?-H2AX免疫熒光染色和彗星實(shí)驗(yàn)檢測白頭翁皂苷A對照射后非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞DNA損傷的影響；
　　(6) Western blot法檢測白頭翁皂苷A對照射

3、后非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的DNA損傷修復(fù)相關(guān)蛋白、周期相關(guān)蛋白以及凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響；
　　(7)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：(1)白頭翁皂苷A明顯抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549、H1975細(xì)胞的生長，其半抑制濃度IC50分別為13.12±0.79μg/ml、10.56±0.68μg/ml，而對人正常支氣管上皮細(xì)胞Beas-2B的毒性作用相對較弱，其IC50為19.84±1.12μg/ml；本研究中選取細(xì)胞存活約80％的藥物濃度（

4、約2μg/ml）做為實(shí)驗(yàn)用藥物濃度；
　　(2)白頭翁皂苷A增加非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞對電離輻射的敏感性：白頭翁皂苷A聯(lián)合照射組相比于單純照射組，A549細(xì)胞系克隆形成率顯著降低（P<0.05），放射增敏比為1.17；H1975細(xì)胞系中白頭翁皂苷A聯(lián)合照射組比單純照射組克隆形成率顯著降低（P<0.05），放射增敏比為1.28。
　　(3)白頭翁皂苷A顯著增加受照射后非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549、H1975細(xì)胞周期 G2/M期阻滯：A

5、549細(xì)胞 G2/M期細(xì)胞的比例由單純照射組（33.16±1.45）%增加至加藥聯(lián)合照射組中的（46.05±1.76）%（P<0.05）；單純照射組H1975細(xì)胞 G2/M期細(xì)胞的比例為（7.62±1.32）%，加藥聯(lián)合照射組H1975細(xì)胞中該比例增加至（63.68±1.31）%（P<0.05）。
　　(4)白頭翁皂苷A顯著增加照射后A549細(xì)胞的早期凋亡，單純照射組和加藥聯(lián)合照射組早期凋亡分別為（26.81±1.70）%、（58

6、.36±2.18）%（P<0.05）；白頭翁皂苷A能顯著增加照射后H1975細(xì)胞的晚期凋亡，細(xì)胞單純照射組和加藥聯(lián)合照射組晚期凋亡分別為（24.31±1.94）%、（46.69±2.42）%（P<0.05）。
　　(5)白頭翁皂苷A能增加非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549、H1975細(xì)胞中由電離輻射引起的DNA損傷：在磷酸化?-H2AX免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)中，對對照組、單純加藥組、單純照射組和加藥聯(lián)合照射組A549細(xì)胞中磷酸化γ-H2AX焦點(diǎn)

7、進(jìn)行計(jì)數(shù)，分別為（6.38±2.47）/細(xì)胞、（12.08±5.28）/細(xì)胞、（21.84±4.87）/細(xì)胞、（30.17±7.85）/細(xì)胞（P<0.05）；各組H1975細(xì)胞中磷酸化γ-H2AX抗體焦點(diǎn)形成，分別為（10.08±3.87）/細(xì)胞、（24.18±3.52）/細(xì)胞、（16.06±2.77）/細(xì)胞、（34.66±10.06）/細(xì)胞（P<0.05）；在單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)中，對照組、單純加藥組、單純照射組和加藥聯(lián)合照射組A549

8、細(xì)胞中彗尾的相對長度（TailDNA%），分別為（2.24±0.09）%/細(xì)胞、（4.38±0.89）%/細(xì)胞、（5.33±0.41）%/細(xì)胞、（6.04±1.48）%/細(xì)胞（P<0.05）；各組 H1975細(xì)胞中彗尾的相對長度（TailDNA%），分別為（1.12±0.41）%/細(xì)胞、（4.91±1.35）%/細(xì)胞、（2.87±0.91）%/細(xì)胞、（6.92±1.35）%/細(xì)胞（P<0.05）；
　　(6) Western bl

9、ot法檢測發(fā)現(xiàn)，相比于單純照射組，白頭翁皂苷A聯(lián)合電離輻射處理后，A549、H1975細(xì)胞中DNA損傷修復(fù)相關(guān)蛋白Mre11、DNA-PKcs、Ku80，周期相關(guān)蛋白CyclinE、CyclinB1以及抗凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2的表達(dá)均下降。
　　結(jié)論：(1)白頭翁皂苷A對非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞不僅具有生長抑制作用，白頭翁皂苷A聯(lián)合電離輻射還可顯著增加對非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的殺傷作用。
　　(2)白頭翁皂苷A影響非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞對電離輻