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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:探討轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)信號(hào)在成纖維細(xì)胞促血管生成中發(fā)揮的作用。
方法:ELISA檢測(cè)Hepa1-6細(xì)胞上清液TGF-β1的含量;將分離得到的胎鼠成纖維細(xì)胞培養(yǎng)至第三代后分為3組,分別用普通培養(yǎng)液(DMEM/F12組)、含等量Hepa1-6細(xì)胞上清液的條件培養(yǎng)液(Hepa1-6組)以及加入1uM TGF-β1受體抑制劑(GW788388)的條件培養(yǎng)液(GWHepa1-6組)培養(yǎng);采用qPCR、免疫熒光雙染法
2、檢測(cè)培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞中α平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A(VEGFA)的mRNA及蛋白質(zhì)表達(dá)水平;采用基質(zhì)膠(Matrigel)血管形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)成纖維細(xì)胞上清液作用下EA.hy926細(xì)胞成管能力。
結(jié)果:與DMEM/F12相比,Hepa1-6細(xì)胞上清液中TGF-β1的含量明顯升高(P<0.01);與DMEM/F12組和GWHepa1-6組比較,Hepa1-6組成纖維細(xì)胞中α-SMA mRNA和蛋白質(zhì)相對(duì)水平明顯
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