TGF-β1對體外血管外膜成纖維細(xì)胞的影響.pdf

1、研究背景：轉(zhuǎn)化生長因子β1（Transforming growth factor-β1，TGF-β1）是一種高度多效、多功能性的生長與分化因子。當(dāng)血管損傷后，局部產(chǎn)生的細(xì)胞因子引起炎癥反應(yīng)是血管再狹窄的主要原因。其中，TGF-β1在局部水平上調(diào)刺激血管平滑肌細(xì)胞（Vascular smooth muscle cell，VSMC）增殖和遷移、促進(jìn)動脈外膜細(xì)胞的表型改變、增殖和遷移以及局部細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix

2、，ECM）蛋白的產(chǎn)生和沉積，從而促進(jìn)血管再狹窄。ECM是組成間質(zhì)、上皮和血管中基質(zhì)的不溶性結(jié)構(gòu)成分，是細(xì)胞存在和相互聯(lián)系的環(huán)境和媒介。基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-9（matrix metalloproteinase，MMP-9）是降解ECM成份中的大分子蛋白的關(guān)鍵酶。實(shí)驗(yàn)表明，病理情況下潛在型MMP-9被激活，其表達(dá)上調(diào)，在動脈粥樣硬化斑塊的形成、發(fā)展及破裂中發(fā)揮重要作用。過氧化物酶體增殖物激活型受體（peroxisome prolifter

3、ator-axtivated receptor，PPAR）是一類配體依賴的轉(zhuǎn)錄因子，可通過與靶基因的反應(yīng)元件結(jié)合直接控制多種基因。已發(fā)現(xiàn)PPARγ對VSMC的增殖、遷移有抑制作用，有許多有益心血管的作用。近年的研究表明血管外膜也參與心血管病的發(fā)生。本研究通過體外實(shí)驗(yàn)，研究TGF-β1在血管外膜成纖維細(xì)胞（adventitial fibroblasts，Afs）中的作用，及其對MMP-9的影響。PPARγ對TGF-β1誘導(dǎo)的血管外膜成纖維

4、細(xì)胞及MMP-9中的影響。 目的：本研究觀察TGF-β1在體外對Afs中表型、增殖、遷移、及MMP-9的影響，分析其可能的機(jī)制。此外，用PPARγ激動劑羅格列酮對TGF-β1誘導(dǎo)的Afs進(jìn)行干預(yù)，觀察其對TGF-β1誘導(dǎo)結(jié)果的影響，從而探求新的抑制血管再狹窄方法。 方法：體外培養(yǎng)SD（Sprague Dawley）大鼠胸主動脈Afs，應(yīng)用免疫組化法、western blot法測細(xì)胞表型改變、MTT法測細(xì)胞增殖、Trans

5、well Chamber法測細(xì)胞遷移、real-time PCR、Western blot方法檢測基因、蛋白的表達(dá)及酶的活性。 結(jié)果： 1.TGF-β1可呈劑量和時間依賴性促進(jìn)Afs平滑肌a2肌動蛋白（α-SM-actin）的表達(dá)，使其向肌成纖維細(xì)胞（myofibroblast，MF）表型轉(zhuǎn)變，繼而增加I型膠原的合成，與對照組相比有顯著意義，（P<0.05）。 2.TGF-β1可呈劑量依賴性促進(jìn)Afs的增殖和遷移

6、，TGF-β1可劑量和時間依賴性增加MMP-9 mRNA表達(dá)，增加MMP-9的活性，與對照組相比有顯著意義，（P<0.05）。 3.PPAR-γ羅格列酮可呈劑量依賴性抑制TGF-β1誘導(dǎo)Afs的表型轉(zhuǎn)變、I型膠原的合成，以及增殖和遷移，與對照組相比有顯著意義（P<0.05）。 4.PPAR-γ羅格列酮可呈劑量依賴性抑制TGF-β1誘導(dǎo)產(chǎn)生MMP-9活性，抑制MMP-9 mRNA，與對照組相比有顯著意義，（P<0.05）。