miR-145在MO感染肺成纖維細(xì)胞TGF-β-Smad促纖維化通路中的作用.pdf

1、綿羊肺炎支原體（Mycoplasma ovipneumoniae，MO）是一種致病性微生物，感染綿羊后可導(dǎo)致綿羊出現(xiàn)喘氣、咳嗽、漸進(jìn)性消瘦和間質(zhì)性肺炎等癥狀，嚴(yán)重的可導(dǎo)致綿羊死亡，給羊養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)重大的危害，并會(huì)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。間質(zhì)性肺炎的病理改變特征之一為肺間質(zhì)纖維化，這是一種以細(xì)胞外基質(zhì)沉積而造成的漸進(jìn)性疾病。研究表明，TGF-β/Smad促纖維化通路在肺纖維化的形成過(guò)程中起著重要的作用。microRNAs是一類可通過(guò)靶向作用于其

2、靶mRNA，并使其靶mRNA的翻譯受到抑制的內(nèi)源性非編碼小RNA，它的長(zhǎng)度約為21bp～25bp，在進(jìn)化上高度保守。miR-145是一種22nt的高度保守的miRNA，目前有關(guān)miR-145在肺間質(zhì)纖維化調(diào)節(jié)方面的研究甚少，尤其是miR-145對(duì)MO感染肺成纖維細(xì)胞（MRC-5）中TGF-β/Smad信號(hào)通路的調(diào)控研究尚未見(jiàn)報(bào)道，因此研究mi R-145在MO感染MRC-5細(xì)胞TGF-β/Smad促纖維化通路中的作用有著重要的價(jià)值和意義

3、。
　　本實(shí)驗(yàn)中首先對(duì)綿羊基因組是否存在miR-145進(jìn)行驗(yàn)證，然后利用生物信息學(xué)軟件對(duì)miR-145在TGF-β/Smad信號(hào)通路中的靶基因進(jìn)行預(yù)測(cè)，再通過(guò)熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)對(duì)預(yù)測(cè)到的靶基因進(jìn)行驗(yàn)證;成功構(gòu)建MO感染MRC-5細(xì)胞模型，通過(guò)對(duì)miR-145的過(guò)表達(dá)和抑制，來(lái)探究miR-145在MO感染MRC-5細(xì)胞TGF-β/Smad促纖維化通路中作用，為探究miR-145在抗MO感染中的作用機(jī)制提供相關(guān)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)的主

4、要研究結(jié)果如下:
　　(1)通過(guò)基因擴(kuò)增和測(cè)序技術(shù)確定了綿羊基因組中含有miR-145，其序列與本課題組前期實(shí)驗(yàn)中做的miRNA表達(dá)譜中所測(cè)的序列一致。
　　(2)利用生物信息學(xué)軟件對(duì)miR-145在TGF-β/Smad促纖維化通路中的靶基因進(jìn)行預(yù)測(cè)，預(yù)測(cè)到miR-145的靶基因是Smad3和Smad4，并通過(guò)雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)miR-145在TGF-β/Smad促纖維化通路中的靶基因是Smad3，而Smad4并

5、不是miR-145的靶基因。
　　(3)成功建立了MO感染MRC-5細(xì)胞模型，MO感染MRC-5細(xì)胞后，細(xì)胞中miR-145和纖維化相關(guān)因子的表達(dá)量顯著升高。
　　(4)對(duì)MO感染MRC-5細(xì)胞中miR-145進(jìn)行過(guò)表達(dá)和抑制，通過(guò)mRNA和蛋白水平上的表達(dá)差異檢測(cè)表明miR-145可靶向TGF-β/Smad促纖維化通路中的關(guān)鍵因子Smad3，進(jìn)而影響通路下游因子的表達(dá)，實(shí)現(xiàn)對(duì)TGF-β/Smad促纖維化通路的負(fù)向調(diào)控作用。