齊墩果烷三萜類化合物CDDO-Me治療C57BL-6小鼠放射性肺損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀察齊墩果烷三萜類化合物CDDO-Me對(duì)C57BL/6小鼠放射性肺炎和肺纖維化的治療效果，并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行初步探討。
　　方法：選擇6-8周齡C57BL/6雌性小鼠88只，分為放射性肺炎組和放射性肺纖維化組。炎癥組小鼠隨機(jī)分為四組，空白對(duì)照組、CDDO-Me組、單純照射組和照射+CDDO-Me組，每組12只；纖維化組分組同炎癥組，每組10只。采用瓦里安直線加速器6MV-X射線對(duì)小鼠右側(cè)胸腔進(jìn)行單次單前野照射，炎癥組照射劑量

2、為12.5 Gy，纖維化組照射劑量為22.5Gy，空白對(duì)照組和CDDO-Me組小鼠只麻醉不照射。炎癥組中的照射+CDDO-Me組和CDDO-Me組分別于照射前1天和照射后第1、3、5天給予600ng CDDO-Me灌胃，纖維化組中的照射+CDDO-Me組和CDDO-Me組分別于照射前1天和照射后第1、3、5、7、9天給予600ng CDDO-Me灌胃，炎癥和纖維化組的空白對(duì)照組和單純照射組于相同時(shí)間點(diǎn)給予等容量生理鹽水灌胃。炎癥組于照射

3、后3周，每組取6只小鼠，取右肺上葉部分進(jìn)行 HE染色觀察肺組織病理變化，右肺中葉肺組織勻漿用ELISA方法檢測(cè)細(xì)胞因子TGFβ1、IL-6和IL-10的水平，剩余肺組織勻漿用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR（quantitative real-time，qPCR）方法檢測(cè)前纖維化因子α-SMA、Col1a1和FN mRNA表達(dá)。每組另外6只小鼠，對(duì)右肺進(jìn)行肺泡灌洗，右肺肺泡灌洗液（BALF）進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類，用BCA方法檢測(cè)BALF蛋白含量。纖維

4、化組于照射后12周處死小鼠，用qPCR方法檢測(cè)纖維化標(biāo)志物α-SMA、Col1a1和FN mRNA表達(dá)，Masson染色觀察肺纖維化病理改變，用堿水解法測(cè)定肺組織羥脯氨酸（hydroxyproline，Hyp）含量。
　　結(jié)果：（1）病理檢查顯示，炎癥和纖維化組中的照射+CDDO-Me組小鼠肺組織損傷程度較單純照射組明顯減輕，肺炎評(píng)分和纖維化Ashcroft評(píng)分顯示出顯著性差異，P值均<0.001；（2）ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示，單

5、純照射組肺組織炎癥因子TGFβ1、IL-6、IL-10水平較空白對(duì)照組顯著升高，P值均<0.001，照射+CDDO-Me組TGFβ1、 IL-6水平較單純照射組明顯下降，P值均<0.05，照射+CDDO-Me組IL-10水平較單純照射組升高，P<0.01；（3）BALF檢測(cè)結(jié)果顯示，單純照射組與空白對(duì)照組比較，BALF細(xì)胞總數(shù)、炎性細(xì)胞（中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞）所占比例及蛋白含量均顯著升高，P值均<0.001，照射+CDDO-Me組與單純

6、照射組比較，BALF細(xì)胞總數(shù)、炎性細(xì)胞比例及蛋白含量均明顯降低，P值均<0.01；（4）qPCR方法檢測(cè)炎癥和纖維化各組前纖維化因子α-SMA、Col1a1和FN mRNA表達(dá)水平，結(jié)果顯示，單純照射組三種因子的mRNA表達(dá)水平較空白對(duì)照組明顯升高，P值均<0.001；照射+CDDO-Me組三種因子 mRNA表達(dá)水平較單純照射組顯著下降，P值均<0.05。（5）肺組織 Hyp測(cè)定結(jié)果顯示，單純照射組 Hyp含量較空白對(duì)照組明顯升高，P<