抗體的非對(duì)應(yīng)性激發(fā)及其與H2-Eb等位基因多態(tài)性的關(guān)聯(lián).pdf

1、目的：天然自身抗體(natural autoantibody，NAA)指的是沒(méi)有經(jīng)過(guò)任何抗原的主動(dòng)免疫，機(jī)體所產(chǎn)生的針對(duì)一種或者多種自身和（或）外來(lái)抗原的抗體，廣泛存在于幾乎所有的脊椎動(dòng)物體內(nèi)。本文通過(guò)對(duì)免疫小鼠得到的血清進(jìn)行四種抗體（抗牛血清白蛋白抗體、抗人血清白蛋白抗體、抗卵清蛋白抗體和抗魚精蛋白抗體）的檢測(cè)，觀察其非對(duì)應(yīng)性激發(fā)現(xiàn)象，并用上述四種抗原進(jìn)行交叉檢測(cè)；應(yīng)用PCR-SSP技術(shù)等，分析其與H2-Eb等位基因的多態(tài)性的關(guān)聯(lián)；探

2、索天然自身抗體的來(lái)源。
　　 方法：
　　 1．用已知濃度的牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)血清，做酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)，檢測(cè)待測(cè)血清中抗體的相對(duì)含量，建立一個(gè)基于ELISA法來(lái)測(cè)定抗體含量的精密方法。
　　 2．采用回收試驗(yàn)法對(duì)以上方法進(jìn)行驗(yàn)證。
　　 3．選出與小鼠親緣關(guān)系較近的兩種白蛋白（牛血清白蛋白和人血清白蛋白）和兩種與小鼠親緣關(guān)系較遠(yuǎn)的兩種蛋白（卵清蛋白和魚精蛋白）作為抗原物質(zhì)，采用間隔免疫

3、的方法建立非對(duì)應(yīng)性激發(fā)的動(dòng)物模型，制備實(shí)驗(yàn)用的待測(cè)血清。
　　 4．分別用以上四種抗原包被酶標(biāo)板，并測(cè)量待測(cè)血清中各種抗體的水平。將加強(qiáng)免疫兩次得到的小鼠血清按照抗原種類分別混合后作為標(biāo)準(zhǔn)品。
　　 5．取用加強(qiáng)免疫組的小鼠的肝臟，提取基因組DNA，采用PCR-SSP技術(shù)檢測(cè)小鼠H2-Eb等位基因中MudoEb5和MudoEb7位點(diǎn)的基因多態(tài)性，并分析H2-Eb等位基因多態(tài)性與小鼠體內(nèi)抗體的變化情況之間的關(guān)系。
　

4、　 結(jié)果：
　　 1．回收試驗(yàn)的回歸系數(shù)R2=0.994，回歸方程為Y=1.097X-11.021，回歸曲線(line)的線性良好，抗體相對(duì)含量與血清濃度呈正相關(guān)，回收試驗(yàn)成功，ELISA實(shí)驗(yàn)方法準(zhǔn)確可靠。
　　 2．間斷免疫法制備待檢血清的方法有效。小鼠體內(nèi)抗體被相關(guān)抗原自身激發(fā)后，加強(qiáng)免疫組與基礎(chǔ)免疫組的抗體含量有顯著性差異，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3．四種抗體中，抗人血清白蛋白抗體在受到魚

5、精蛋白激發(fā)后，明顯增多，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；另外3種抗體受到非對(duì)應(yīng)性抗原激發(fā)后變化不明顯，P＞0.05，差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 4.45只小鼠中MudoEb5檢測(cè)到陽(yáng)性的有36只，陽(yáng)性率為80％，MudoEb7檢測(cè)到陽(yáng)性的有40只，陽(yáng)性率為88.89%;抗卵清蛋白抗體在受到人血清白蛋白激發(fā)后，沒(méi)有MudoEb5等位基因的，加強(qiáng)免疫組比基礎(chǔ)免疫組的抗體相對(duì)含量明顯增多，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其余的非對(duì)應(yīng)性

6、激發(fā)反應(yīng)，無(wú)論有無(wú)MudoEb5等位基因和（或）MudoEb7等位基因，加強(qiáng)免疫組與基礎(chǔ)免疫組之間的抗體相對(duì)含量均無(wú)明顯差異，P＞0.05，差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：
　　 1．應(yīng)用ELISA檢測(cè)抗體含量的方法精密有效。
　　 2．某些抗體（如小鼠抗人血清白蛋白抗體）可能被無(wú)關(guān)的非對(duì)應(yīng)性抗原（如魚精蛋白）非對(duì)應(yīng)性激發(fā)。
　　 3．非對(duì)應(yīng)性激發(fā)與某些基因位點(diǎn)可能有一定關(guān)系（如人血清白蛋白非對(duì)應(yīng)激發(fā)小