辣根過氧化物酶及免疫磁珠在腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)中的應(yīng)用.pdf

1、目的：
　　1.建立一種辣根過氧化酶(HRP)電化學(xué)檢測(cè)法。
　　2.建立一種免疫磁珠檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物的電化學(xué)方法。
　　3.考察免疫磁珠檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物與酶聯(lián)免疫法的相關(guān)性。
　　方法：
　　1.3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)-過氧化氫(H2O2)-HRP體系中HRP和HRP標(biāo)記物的電化學(xué)檢測(cè)方法。
　　采用碳漿印刷電級(jí)為工作電極；檢測(cè)體系為0.8 mmol/L TMB溶液15μL，15 m

2、mol/L的H2O2溶液25μL，加入HRP5.0×10-10g/mL4μL充分混合，滴加到印刷電極上，反應(yīng)5 min后進(jìn)行測(cè)定。設(shè)定電壓范圍-0.1 V～0.4 V，先用循環(huán)伏安法進(jìn)行定性分析，然后再用差分脈沖伏安法(DPV)進(jìn)行定量測(cè)定。
　　2.免疫磁珠在腫瘤標(biāo)志物中的應(yīng)用
　　免疫磁珠按如下方法制備：首先，將鏈霉親和素結(jié)合在帶有環(huán)氧基官能團(tuán)的磁珠上，利用鏈霉親和素和生物素結(jié)合的特異性，將生物素標(biāo)記的CA199結(jié)合在磁

3、珠上，形成生物素化的抗體磁珠復(fù)合物。最后用1％的BSA封閉活性磁珠上的位點(diǎn)。若標(biāo)本中存在相應(yīng)的抗原則加入HPR標(biāo)記的酶標(biāo)抗體后，經(jīng)過洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)抗體，最后形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗體-磁珠的免疫復(fù)合物。利用磁珠的磁性可將此免疫復(fù)合物固定在磁場(chǎng)中的印刷電極上，加入底物緩沖溶液，用DPV進(jìn)行檢測(cè)。
　　結(jié)果：
　　1.DPV檢測(cè)HRP濃度，在1.1×10-13～5.0×10-11g/mL濃度范圍內(nèi)與響應(yīng)信號(hào)成線性，檢測(cè)限為8

4、.7×10-13g/mL。
　　2.電化學(xué)響應(yīng)信號(hào)與CA199抗原的濃度成線性，線性范圍為3.0～60 U/L。日間重復(fù)日內(nèi)精密度為0.7～1.4％，日間精密度為1.0～6.9％。檢測(cè)限為1.6 U/mL?？疾炝酥苽涿庖叽胖榈姆€(wěn)定性，無保護(hù)劑的存在下穩(wěn)定性為7天。
　　結(jié)論：
　　1.實(shí)現(xiàn)了電化學(xué)檢測(cè)HRP及HRP標(biāo)記物的方法，該方法簡(jiǎn)單快速、成本低、靈敏度高。
　　2.實(shí)現(xiàn)了免疫磁珠在腫瘤標(biāo)志物中的應(yīng)用，該方法