辣根過氧化物酶及免疫磁珠在腫瘤標志物檢測中的應用.pdf

1、目的：
　　1.建立一種辣根過氧化酶(HRP)電化學檢測法。
　　2.建立一種免疫磁珠檢測腫瘤標志物的電化學方法。
　　3.考察免疫磁珠檢測腫瘤標志物與酶聯(lián)免疫法的相關性。
　　方法：
　　1.3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)-過氧化氫(H2O2)-HRP體系中HRP和HRP標記物的電化學檢測方法。
　　采用碳漿印刷電級為工作電極；檢測體系為0.8 mmol/L TMB溶液15μL，15 m

2、mol/L的H2O2溶液25μL，加入HRP5.0×10-10g/mL4μL充分混合，滴加到印刷電極上，反應5 min后進行測定。設定電壓范圍-0.1 V～0.4 V，先用循環(huán)伏安法進行定性分析，然后再用差分脈沖伏安法(DPV)進行定量測定。
　　2.免疫磁珠在腫瘤標志物中的應用
　　免疫磁珠按如下方法制備：首先，將鏈霉親和素結合在帶有環(huán)氧基官能團的磁珠上，利用鏈霉親和素和生物素結合的特異性，將生物素標記的CA199結合在磁

3、珠上，形成生物素化的抗體磁珠復合物。最后用1％的BSA封閉活性磁珠上的位點。若標本中存在相應的抗原則加入HPR標記的酶標抗體后，經(jīng)過洗滌除去未結合的酶標抗體，最后形成抗原-抗體-酶標抗體-磁珠的免疫復合物。利用磁珠的磁性可將此免疫復合物固定在磁場中的印刷電極上，加入底物緩沖溶液，用DPV進行檢測。
　　結果：
　　1.DPV檢測HRP濃度，在1.1×10-13～5.0×10-11g/mL濃度范圍內(nèi)與響應信號成線性，檢測限為8

4、.7×10-13g/mL。
　　2.電化學響應信號與CA199抗原的濃度成線性，線性范圍為3.0～60 U/L。日間重復日內(nèi)精密度為0.7～1.4％，日間精密度為1.0～6.9％。檢測限為1.6 U/mL?？疾炝酥苽涿庖叽胖榈姆€(wěn)定性，無保護劑的存在下穩(wěn)定性為7天。
　　結論：
　　1.實現(xiàn)了電化學檢測HRP及HRP標記物的方法，該方法簡單快速、成本低、靈敏度高。
　　2.實現(xiàn)了免疫磁珠在腫瘤標志物中的應用，該方法