辣根過氧化物酶標記二氧化硅納米顆粒的制備及其在免疫分析中的應用.pdf

1、本文圍繞一種基于二氧化硅納米顆粒的免疫酶標記物的制備方法展開。酶聯(lián)免疫分析(Enzyme—linkedimmunosorbantassay，ELISA)是所有免疫分析方法中應用最為廣泛的方法，而基于納米顆粒作為標記物的免疫分析方法則是一個新興的研究熱點，本論文將這兩者結合在一起開展了相關的研究。 第一章為緒論，介紹了酶聯(lián)免疫分析的研究進展，重點介紹了酶聯(lián)免疫分析的各種標記放大手段。 第二章是辣根過氧化物酶標記二氧化硅納米

2、顆粒的制備及其在夾心法ELISA中的應用。這一章詳細介紹了辣根過氧化物酶標記二氧化硅納米顆粒的及其抗體復合物制備過程，并以乙肝表面抗原為檢測模型進行實際應用。我們通過油包水(W/O)型微乳體系，制備了直徑為50±5nm的二氧化硅納米顆粒，以此為載體，制備了抗體—酶—硅納米顆粒復合物。通過氨基硅烷修飾在硅納米顆粒的表面引入氨基，然后利用高碘酸鈉氧化法將HRP標記在顆粒表面，最后通過氧化葡聚糖的橋接作用將乙肝表面的抗體分子標記到酶標記的納米

3、顆粒表面。我們考察了三種不同氨基硅烷對于HRP標記效率的影響，利用免疫分析的效果來考察HRP和抗體分子不同的用量對于酶標記二氧化硅納米顆?！贵w復合物標記效果的影響。最后在最優(yōu)的條件下檢測乙肝表面抗原，其靈敏度達到0.06ng/mL，線性范圍0.15—12.5ng/mL，對260份血清樣品的檢測結果與傳統(tǒng)的ELISA完全一致，對30份陽性血清樣品的檢測結果與傳統(tǒng)ELISA相關性良好，相關系數(shù)r為0.992。 第三章介紹了辣根過氧

4、化物酶標記二氧化硅納米顆粒在氯霉素檢測中的應用，在這一章中通過檢測小分子藥物氯霉素的實驗來考察辣根過氧化物酶標記二氧化硅納米顆粒在競爭型ELISA中應用的可行性。實驗中，我們采用了三種不同的免疫分析策略以及兩種氨基硅烷制備的酶標記物對氯霉素進行檢測。該方法對氯霉素檢測的靈敏度最低可以達到0.012ng/mL，而且線性良好。以我們最終選定的策略和標記物進行回收率實驗，回收率在85.01％—101.23％之間，CV在6.89％-25.66％