替米沙坦對異丙腎上腺素所致心肌肥厚大鼠中RASSF1A作用機制及影響.pdf

1、背景與目的：
　　 心肌肥厚是心肌細胞在機械壓力和神經(jīng)體液刺激下主要的病理生理反應(yīng)。心肌肥厚通過使心肌細胞肥大、心肌細胞蛋白合成增加和細胞外基質(zhì)增生以促進心臟做功,維持心臟的泵血功能。盡管在上述刺激的早期心肌肥厚被認為是心臟的代償性反應(yīng),但在上述刺激的長期作用下心肌肥厚可促進正常心臟向心力衰竭演變。無論是對動物模型、還是對慢性肥厚性心肌病患者和高血壓患者的研究中也表明控制心肌肥厚逆轉(zhuǎn)左室肥厚對于阻斷心力衰竭的發(fā)生至關(guān)重要。因此有

2、關(guān)心肌肥厚的相關(guān)信號通路及通路中所涉及到的相關(guān)因子成為大家研究的焦點。目前研究發(fā)現(xiàn)Ras/Raf/ERK1/2信號調(diào)節(jié)通路與心肌肥厚的發(fā)生密切相關(guān)。
　　 Ras是小G蛋白家族成員之一,通常情況下Ras以Ras-GDP的形式存在,但是在外界刺激的作用下轉(zhuǎn)變?yōu)镽as-GTP,這是其活化狀態(tài)。Ras-GTP可以催化下游因子從而組成完整信號通路。Raf是發(fā)現(xiàn)的首個Ras-GTP直接作用的下游因子,Raf可被Ras-GTP磷酸化。磷酸化

3、Raf即p-Raf可通過級聯(lián)反應(yīng)磷酸化細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)1/2,磷酸化ERK1/2即p-ERK1/2可調(diào)節(jié)細胞質(zhì)和細胞核內(nèi)多種靶蛋白,這些靶蛋白涉及到心臟組織中各種生長反應(yīng)包括心肌肥厚的發(fā)生。它們共同組成Ras/Raf/ERK1/2信號通路。Ras相關(guān)結(jié)構(gòu)域家族基因1A(Ras effector Ras-assoeiation domain fami

4、ly1A,RASSF1A)是一個位于3P21.3染色體上的抑癌基因。研究提示RASSF1A可調(diào)節(jié)Ras-GTP的結(jié)構(gòu)功能而影響Raf磷酸化。RASSF1A是Ras信號通路的效應(yīng)因子。在腎上腺素誘導(dǎo)下RASSF1A過度表達心肌細胞中心肌肥厚反應(yīng)較野生型心肌細胞相比明顯減低,RASSF1A對心肌肥厚可能有負性調(diào)節(jié)作用,該作用可能與調(diào)節(jié)Ras/Raf/ERK1/2信號通路有關(guān)。
　　 替米沙坦是一種血管緊張素受體拮抗(Angioten

5、sinⅡ receptor blocker,ARB),ARB可以阻止血管緊張素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)與血管緊張素受體結(jié)合抑制心肌肥厚。AngⅡ作為神經(jīng)體液刺激中的一種,可以通過與其受體結(jié)合激活諸多信號通路促進心肌肥厚,這其中包括Ras/Raf/ERK1/2信號通路的激活。因此不排除ARB抑制心肌肥厚的機制之一是通過抑制Ras/Raf/ERK1/2信號通路而實現(xiàn)的。
　　 本研究采用皮下注射異丙腎上腺素建立大鼠心

6、肌肥厚模型,觀察在大鼠肥厚心肌組織中RASSF1A、p-Raf和p-ERK1/2表達情況及其相關(guān)性,探討RASSF1A在心肌肥厚中的作用,及替米沙坦在逆轉(zhuǎn)心肌肥厚方面可能的機制,為逆轉(zhuǎn)心肌肥厚治療心力衰竭提供新的分子靶點。
　　 方法：
　　 成年清潔級雌性SD大鼠30只,隨機分為3組(每組10只):對照組、模型組和干預(yù)組。除對照組外其余兩組皮下注射異丙腎上腺素3mg/(kg·d)建立心肌肥厚模型,對照組皮下注射生理鹽水

7、6ml/(kg·d)作為對照。干預(yù)組予替米沙坦8.33mg/(kg·d)灌胃,對照組和模型組予等量蒸餾水灌胃。各組同時連續(xù)皮下注射和灌胃10天后運用生物信號系統(tǒng)測定大鼠血液動力學參數(shù),計算大鼠心臟質(zhì)量指數(shù)和左心室質(zhì)量指數(shù);取左心室心肌組織行HE染色,觀察心肌組織形態(tài)學變化,MASSON染色觀察心肌組織纖維化程度,計算心肌膠原纖維容積分數(shù)(CVF);逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測心房利鈉因子(ANF)及RASSF1A的mRNA相對

8、含量,免疫組化方法觀察RASSF1A、p-Raf和p-ERK1/2蛋白表達情況。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)果：
　　 1血液動力學變化
　　 左室收縮壓(LVSP):模型組<干預(yù)組<對照組(130.55±5.73mmHg vs123.96±7.45mmHgvs145.93±6.83mmHg,均P<0.05)。左室舒張末壓(LVEDP):模型組>干預(yù)組>對照組(6.63±0.32mmHg vs5.

9、67±0.36mmHg vs4.49±0.36mmHg,均P<0.05)。左心室壓力最大上升速率(+dp/dtmax):模型組<干預(yù)組<對照組(5681.04±92.19 mmHg/s vs6237.42±37.50 mmHg/s vs6723.09±82.78 mmHg/s,均P<0.05)。左心室壓力最大下降速率(·dp/dtmax):模型組<干預(yù)組<對照組(4632.04±138.70 mmHg/s vs4938.84±105.4

10、6 mmHg/s vs5256.85±145.11 mmHg/s,均P<0.05)。
　　 2心臟質(zhì)量指數(shù)和左心室質(zhì)量指數(shù)測定
　　 心臟質(zhì)量指數(shù)(HW/BW):模型組>干預(yù)組>對照組(3.69±0.03mg/g vs3.44±0.01mg/g vs3.04±0.02mg/g,均P<0.05)。左心室質(zhì)量指數(shù)(LVW/BW):模型組>干預(yù)組>對照組(2.82±0.09mg/g vs2.57±0.07mg/g vs2.31

11、±0.01mg/g,均P<0.05)。
　　 3 HE染色
　　 對照組心肌細胞排列規(guī)律整齊,模型組心肌細胞排列紊亂,有大量的心肌纖維增生并伴有炎性滲出,干預(yù)組介于對照組和模型組之間。
　　 4 MASSON染色和心肌膠原纖維容積分數(shù)(CVF)
　　 模型組中在排列紊亂的心肌細胞間伴有大量的藍染膠原纖維增生,而在對照組中看不到藍染區(qū)域,干預(yù)組介于對照組和模型組之間。各組心肌膠原纖維容積分數(shù)顯示模型組最高,

12、干預(yù)組次之,對照組最低(28.43±5.25 vs14.02±0.95vs4.27±0.84,均P<0.05)。
　　 5逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)
　　 ANF mRNA相對含量模型組>干預(yù)組>對照組(1.60±0.18 vs0.80±0.11 vs1.03±0.23,均P<0.05);RASSF1A mRNA相對含量模型組<干預(yù)組<對照組(0.77±0.11 vs1.76±0.34 vs1.15±0.25,均

13、P<0.05)。
　　 6免疫組化方法
　　 模型組p-Raf陽性區(qū)域平均積分光密度明顯高于對照組,干預(yù)組介于模型組與對照組之間(160.72±11.49 vs115.94±4.06 vs133.28±2.73,均P<0.05);模型組p-ERK1/2陽性區(qū)域平均積分光密度明顯高于對照組,干預(yù)組介于模型組與對照組之間(154.23±4.02 vs92.03±7.34 vs129.24±3.49,均P<0.05);RASS

14、F1A陽性區(qū)域平均積分光密度模型組含量低于對照組,干預(yù)組介于模型組和對照組之間(116.66±3.94 vs168.29±7.49 vs133.8±1.17,均P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.大鼠肥厚心肌組織中p-Raf和p-ERK1/2表達升高,提示Ras/Raf/ERK1/2信號通路參與異丙腎上腺誘導(dǎo)的心肌肥厚的發(fā)生。
　　 2.RASSF1A在異丙腎上腺素誘導(dǎo)的大鼠心肌肥厚模型中低表達,同時p-R