共軛亞油酸轉(zhuǎn)化菌株的篩選及培養(yǎng)條件的研究.pdf

1、共軛亞油酸(conjugated linoleic acid簡稱CLA)是一系列含共軛雙鍵的十八碳脂肪酸的總稱，是必需脂肪酸亞油酸(linoleic acid,LA)的立體幾何異構(gòu)體。天然LA是順-9，順-12十八碳二烯酸(cis-9,cis-12-octadecadienoic acid)，它異構(gòu)化形成的CLA具有多種異構(gòu)體，主要有8，10-、9,11-、10,12-、11,13-四種位置異構(gòu)體。研究表明具有生理活性的異構(gòu)體可能是順-

2、9、反-11和反-10、順-12(9c,11t-、10t,12c-)異構(gòu)體。
　　 CLA具有抗癌、抗動脈粥樣硬化、抗糖尿病、抗血栓、抗氧化、降血壓、調(diào)節(jié)免疫、減少脂肪沉積并增加瘦肉量等多種獨特的生理功能。
　　 制備共軛亞油酸有化學(xué)法和生物合成法?；瘜W(xué)法的缺點是對產(chǎn)物中各種構(gòu)型的CLA無選擇性，生物法與化學(xué)法相比具有選擇性合成生物活性CLA的優(yōu)點。生物方法如酶法生產(chǎn)CLA能夠得到活性較高的異構(gòu)體。
　　 本文根

3、據(jù)共軛亞油酸的生物形成機(jī)理，用不同的培養(yǎng)基，在不同的培養(yǎng)溫度下，以不同量的LA(0.1％～0.25％v/v)作誘導(dǎo)劑，從土壤中篩選能轉(zhuǎn)化LA為CLA的菌株。本實驗從42個土樣中篩選到能轉(zhuǎn)化LA為CLA的菌株9株。
　　 對篩選得到的CLA轉(zhuǎn)化菌株進(jìn)行液體發(fā)酵，定時取樣，發(fā)酵液經(jīng)萃取、干燥、定容，然后用紫外分光光度計測量其紫外吸收，以檢測發(fā)酵進(jìn)程中CLA生成量的變化。以純品共軛亞油酸(CLA)為標(biāo)準(zhǔn)，在232nm處作標(biāo)準(zhǔn)吸收曲線，

4、根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線可計算出發(fā)酵液中CLA的含量。從而確定所篩選菌株的轉(zhuǎn)化能力。并對其產(chǎn)生CLA的條件進(jìn)行了初步的探討，發(fā)現(xiàn)不同的菌株轉(zhuǎn)化LA為CLA的條件是不同的。
　　 對嗜酸乳酸桿菌(L.acidophilusl.1854)產(chǎn)亞油酸異構(gòu)酶的培養(yǎng)條件以及CLA轉(zhuǎn)化條件進(jìn)行了搖瓶實驗研究。通過正交實驗得出產(chǎn)酶的較佳培養(yǎng)條件為：MRS培養(yǎng)基，接種量3％(w/v),LA添加量0.1％(v/v),培養(yǎng)溫度36℃，培養(yǎng)時間36h,pH6.0,

5、(NH4)2S04加入量0.5％(w/v)，乳糖添加量3％(w/v),NaCl添加量1.5％(w/v)。在上述條件下，嗜酸乳酸桿菌產(chǎn)亞油酸異構(gòu)酶的酶活力為157.3(U/ml)。通過單因素和正交實驗得到CLA轉(zhuǎn)化的較佳條件為：LA添加量0.1％(v/v)，培養(yǎng)溫度36℃，保溫時間36h,pH5.0。在此條件下，CLA的產(chǎn)率為38.46％。CLA的產(chǎn)率受到溫度、時間、pH值、亞油酸加入量的影響。
　　 提純所生成的CLA，甲酯化后