雞組織、雞蛋及豬肉中哌嗪殘留柱前衍生--液相色譜熒光檢測法的研究.pdf

1、本研究旨在建立雞組織（肌肉、腎臟、肝臟）、雞蛋（全蛋、蛋清、蛋黃）及豬肉中哌嗪殘留柱前衍生液相色譜熒光檢測(LC-FLD)方法。以京海黃雞和三元（杜×長×約）雜交豬為試驗(yàn)樣品，采用加速溶劑萃取(ASE)和固相萃取(SPE)技術(shù)提取、凈化樣品，建立LC-FLD方法。其主要研究結(jié)果如下:
　　1.優(yōu)化了哌嗪與丹磺酰氯(DNS-Cl)衍生反應(yīng)的條件，并確證了哌嗪在優(yōu)化的條件下發(fā)生單取代反應(yīng)。即移取1.0μg/mL哌嗪100μL，1.0m

2、g/mL DNS-Cl600μL和0.12％三乙胺100μL于10mL離心管中，在50℃條件下避光反應(yīng)20min，生成單取代物1-丹磺?；哙?1-DNS-piperazine)。
　　2.優(yōu)化了利用加速溶劑萃取(ASE)技術(shù)提取雞組織、雞蛋及豬肉中哌嗪殘留的方法。即在80℃，1500psi條件下，用正己烷去脂，2％甲酸乙腈提取雞組織、雞蛋及豬肉中哌嗪殘留。該方法快速、提取效率高。
　　3.建立了雞組織、雞蛋及豬肉中哌嗪殘留

3、高效液相色譜熒光檢測(HPLC-FLD)方法。采用Athena C18(4.6×250mm，5μm)作為色譜柱，流動(dòng)相為水-乙腈體系，梯度洗脫，流速為1.0mL/min，柱溫為25℃，激發(fā)波長和發(fā)射波長分別為330nm和531nm。結(jié)果顯示:哌嗪在雞組織、雞蛋及豬肉中添加濃度在定量限(LOQ)～200.0μg/kg范圍內(nèi)衍生產(chǎn)物峰面積與哌嗪濃度呈良好的線性關(guān)系，決定系數(shù)R2≥0.9992。哌嗪添加濃度為LOQ、0.5MRL、1.0MRL

4、和2.0MRL時(shí)，在雞組織中的回收率為78.49％～97.56％，日內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為2.52％～5.42％，日間RSD為3.32％～6.46％，檢測限(LOD)和LOQ分別為0.96～1.85μg/kg和3.20～5.50μg/kg;在雞蛋中的回收率為72.86％～89.26％，日內(nèi)RSD為2.46％～6.07％，日間RSD為3.08％～6.48％，LOD和LOQ分別為1.92～2.50μg/kg和6.50～7.50μg/kg

5、;在豬肉中的回收率為86.92％～91.13％，日內(nèi)RSD為3.71％～4.65％，日間RSD為4.75％～7.06％，LOD和LOQ分別為1.15μg/kg和3.52μg/kg。
　　4.建立了雞組織、雞蛋及豬肉中哌嗪殘留超高效液相色譜熒光檢測(UPLC-FLD)方法。色譜柱為ACQUITY UPLC HSS T3(2.1×100mm，1.8μm)，流動(dòng)相為水-乙腈(15∶85，V∶V)，流速為0.2mL/min，柱溫為25℃，

6、激發(fā)波長和發(fā)射波長分別為330nm和531nm。結(jié)果顯示:哌嗪在雞組織及豬肉中添加濃度為LOQ～200.0μg/kg，在雞蛋中添加濃度為LOQ～400.0μg/kg時(shí)，衍生產(chǎn)物峰面積與哌嗪濃度都呈良好的線性關(guān)系，決定系數(shù)R2≥0.9991。哌嗪添加濃度為LOQ、0.5MRL、1.0MRL和2.0MRL時(shí)，在雞組織中的回收率為79.64％～99.77％，日內(nèi)RSD為2.62％～6.71％，日間RSD為3.52％～7.77％，LOD和LOQ

7、分別為0.50～1.20μg/kg和1.80～3.50μg/kg;在雞蛋中的回收率為77.07％～89.90％，日內(nèi)RSD為2.44％～5.19％，日間RSD為3.10％～6.63％，LOD和LOQ分別為1.05～1.32μg/kg和3.50～4.20μg/kg;在豬肉中的回收率為87.10％～94.71％，日內(nèi)RSD為2.50％～6.25％，日間RSD為2.58％～6.44％，LOD和LOQ分別為0.62μg/kg和1.85μg/kg