JNK信號(hào)通路對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞功能及其表面TNFR的影響.pdf

1、目的:在前期實(shí)驗(yàn)中，我們通過對(duì)不同時(shí)間低氧培養(yǎng)的小膠質(zhì)細(xì)胞(BV2細(xì)胞)的功能狀態(tài)研究，發(fā)現(xiàn)BV2細(xì)胞在低氧培養(yǎng)1小時(shí)和12小時(shí)下分別起到神經(jīng)保護(hù)和神經(jīng)損傷的作用。本實(shí)驗(yàn)將進(jìn)一步探討B(tài)V2細(xì)胞JNK信號(hào)通路對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞功能及腫瘤壞死因子受體(TNFR)表達(dá)的影響。
　　 方法:以小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞瘤(BV2細(xì)胞株)及大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤(PC12細(xì)胞株)為研究對(duì)象，分別用來代表小膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元。將BV2細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分組為:正常對(duì)照組（常氧組

2、）、低氧1h組、低氧1h+SP600125組、低氧12h組、低氧12h+SP600125組。應(yīng)用westernblot檢測(cè)低氧下BV2細(xì)胞JNK信號(hào)通路阻斷劑SP600125最佳阻斷濃度。然后在不同程度低氧及有無SP600125干預(yù)下培養(yǎng)BV2細(xì)胞，用其培養(yǎng)液來培養(yǎng)PC12細(xì)胞，通過CCK-8法測(cè)定PC12細(xì)胞存活率并以此來反映BV2細(xì)胞功能，同時(shí)應(yīng)用westernblot檢測(cè)BV2細(xì)胞TNF-α受體TNFR1與TNFR2表達(dá)情況，應(yīng)用

3、ELISA法檢測(cè)在不同功能狀態(tài)下BV2細(xì)胞分泌表達(dá)TNF-α、IL-1β、NGF情況。
　　 結(jié)果:
　　 1.正常對(duì)照組和損傷對(duì)照組PC12細(xì)胞的存活率分別為:100％和52.37％;BV2細(xì)胞低氧培養(yǎng)1h時(shí)，PC12細(xì)胞的存活率為75.96％，加入SP600125后PC12細(xì)胞存活率增加到81.88％，差異有顯著性(P＜0.01);BV2細(xì)胞低氧培養(yǎng)12h時(shí)，PC12細(xì)胞的存活率為36.87％，加入SP600125后

4、PC12細(xì)胞存活率可達(dá)57.61％，差異有顯著性(P＜0.01)。
　　 2.在正常情況下，BV2細(xì)胞表面無TNFR1表達(dá)，僅有少量TNFR2表達(dá)。在低氧培養(yǎng)1h時(shí)，TNFR2表達(dá)增多，加入SP600125能進(jìn)一步增加TNFR2的表達(dá)(P＜0.05);在低氧培養(yǎng)12h時(shí)，TNFR1的表達(dá)增多，加入SP600125能進(jìn)一步減少TNFR1的表達(dá)(P＜0.05)。
　　 3.BV2細(xì)胞在常氧培養(yǎng)下，其分泌的TNF-α、IL-1

5、β、NGF分別為447.77±7.62pg/ml、4.38±0.29pg/ml和122.19±4.94pg/ml;BV2細(xì)胞經(jīng)低氧培養(yǎng)1h，其分泌的TNF-α、IL-1β、NGF均有所增加，分別為612.19±15.06pg/ml、15.22±0.73pg/ml和214.22±5.19pg/ml;當(dāng)?shù)脱跖囵B(yǎng)12h，TNF-α和IL-1β水平增加到1265.24±14.36pg/ml、22.87±1.03pg/ml，而NGF的水平則下降到