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文檔簡介
1、目的:
1.探究二肽基肽酶IV(DDP-IV)抑制劑西格列汀對高糖誘導(dǎo)的大鼠腎小管上皮細(xì)胞凋亡是否有保護(hù)作用。
2.檢測MAPK信號通路蛋白JNK的濃度變化,探究二肽基肽酶IV(DDP-IV)抑制劑西格列汀發(fā)揮作用的機(jī)制。
方法:
體外完全培養(yǎng)基培養(yǎng)大鼠腎小管上皮細(xì)胞,待細(xì)胞生長鋪滿培養(yǎng)皿70%-80%時換用無胎牛血清培養(yǎng)基,生長24小時使細(xì)胞生長同步化,之后進(jìn)行分組如下:
?、耪φ战M
2、:低糖(5.5mmol/L)環(huán)境下培養(yǎng);
?、聘咛墙M:高糖(25mmol/L)環(huán)境下培養(yǎng);
?、俏鞲窳型「深A(yù)組:預(yù)先加入西格列汀處理1小時后轉(zhuǎn)移至高糖培養(yǎng)基下培養(yǎng);
?、菾NK信號通路阻斷劑組:預(yù)先加入JNK信號通路的特異性阻斷劑SP600125處理1小時后將大鼠腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)移至高糖培養(yǎng)基下培養(yǎng)。
之后采用流式細(xì)胞術(shù)檢測實(shí)驗(yàn)各組細(xì)胞的凋亡程度,RT-PCR技術(shù)檢測實(shí)驗(yàn)各組細(xì)胞的JNK基因表達(dá)的水平,
3、Western Blot方法測定實(shí)驗(yàn)各組細(xì)胞內(nèi)磷酸化的JNK蛋白的表達(dá)變化。
結(jié)果:
1.流式細(xì)胞術(shù)示:與對照組相比,高糖組細(xì)胞凋亡明顯增多;與高糖組相比,西格列汀干預(yù)組和阻斷劑組細(xì)胞凋亡明顯減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義((P<0.05)。
2.RT-PCR結(jié)果示:與正常組相比,高糖組磷酸化的JNK顯著增高;與高糖組相比,西格列汀組、阻斷劑組磷酸化的JNK均顯著減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義((P<0.05)。
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