阿魏酸鈉對單側(cè)輸尿管梗阻大鼠腎臟保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的：通過建立單側(cè)輸尿管梗阻(UUO)大鼠腎間質(zhì)纖維化模型，并給予阿魏酸鈉進(jìn)行干預(yù)治療，觀察腎間質(zhì)纖維化時Ⅰ型膠原(Col Ⅰ)、Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)、組織型纖溶酶原激活物(t-PA)、尿激酶型纖溶酶原激活物(u-PA)及纖溶酶原激活物抑制劑-1(PAI-1)的動態(tài)表達(dá)情況，以及阿魏酸鈉對腎間質(zhì)纖維化的防治作用和對上述相關(guān)指標(biāo)的影響，為臨床腎間質(zhì)纖維化的防治探索新的方法并提供實(shí)驗(yàn)性理論依據(jù)。 方法：實(shí)驗(yàn)采用UUO制造腎間質(zhì)纖維

2、化模型，將96只雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常組、假手術(shù)組、UUO組及阿魏酸鈉治療組共4組，每組24只，每組分別在實(shí)驗(yàn)第1、4、7、14天設(shè)立觀察點(diǎn)，每個觀察點(diǎn)6只。在實(shí)驗(yàn)各觀察點(diǎn)分別處死實(shí)驗(yàn)動物，取血檢測血肌酐、尿素氮的濃度；運(yùn)用病理技術(shù)，光鏡400倍下觀察HE染色切片腎間質(zhì)纖維化面積及腎小管損傷情況；運(yùn)用免疫組織化學(xué)技術(shù)半定量分析各組動物標(biāo)本Col Ⅰ、Col Ⅲ、u-PA、t-PA及PAI-1的表達(dá)情況。對腎小管損害程度采用百分比評分法

3、進(jìn)行評估，計(jì)算20個高倍視野(×400)中受損腎小管的數(shù)目及腎小管總數(shù)，以受損的腎小管數(shù)目占總腎小管數(shù)目的百分比表示其受損程度。腎間質(zhì)纖維化程度采用評分法進(jìn)行評判，其標(biāo)準(zhǔn)為：0分：間質(zhì)面積與視野總面積之比<5％；1分：間質(zhì)面積與視野總面積之比介于5％-19％；2分：間質(zhì)面積與視野總面積之比介于20％-39％；3分：間質(zhì)面積與視野總面積之比介于40％-57％；4分：間質(zhì)面積與視野總面積之比≥60％。每張切片取20個不重疊的視野，分別對每個

4、視野進(jìn)行打分，取平均值為該標(biāo)本的終值。免疫組織化學(xué)評分標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)腎間質(zhì)小管細(xì)胞陽性著色的程度分為5級：陰性計(jì)0分；微量著色計(jì)0.5分；輕度著色計(jì)1分；中度著色計(jì)2分；廣泛著色計(jì)3分，每張切片取20個不重疊視野計(jì)分，取均值作為該片最終計(jì)分。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析時所有數(shù)據(jù)用-x±s表示，利用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用單因素方差分析比較各組間差異，P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果：各組實(shí)驗(yàn)動物血肌酐、尿素氮均無顯著差異性(P>

5、0.05)。假手術(shù)組及正常組腎臟未見明顯小管損傷情況；造模組和治療組腎小管損傷程度較假手術(shù)組明顯加重(P<0.01)；治療組與造模組相比，損傷程度則明顯減輕(P<0.05，P<0.01)。假手術(shù)組及正常對照組腎間質(zhì)中未見明顯纖維化改變；UUO組及阿魏酸鈉治療組纖維化程度較假手術(shù)組明顯加重，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而阿魏酸鈉治療組纖維化程度較UUO組明顯減輕，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。正常對照組大鼠腎臟組織中即可見t-P

6、A表達(dá)，主要部位在腎小管上皮細(xì)胞；與正常組相比較，假手術(shù)組各對應(yīng)觀察點(diǎn)t-PA表達(dá)明顯降低，差異有顯著性(P<0.01)：造模組與假手術(shù)組相比，t-PA表達(dá)在術(shù)后第7、14天表達(dá)明顯降低(P<0.01)；與造模組相比，治療組術(shù)后第4、7、14天的表達(dá)比相應(yīng)觀察點(diǎn)明顯增加，差異有顯著性(P<0.01或P<0.05)。u-PA在正常對照組大鼠腎臟組織中即有表達(dá)，主要部位在腎小管上皮細(xì)胞。與正常組相比較，假手術(shù)組各對應(yīng)觀察點(diǎn)u-PA表達(dá)降低；

7、造模組與假手術(shù)組相比，u-PA表達(dá)在術(shù)后第7、14天表達(dá)明顯降低，差異有顯著性(P<0.01)；與造模組相比，治療組術(shù)后第1、4、7、14天的表達(dá)比相應(yīng)觀察點(diǎn)明顯增加，差異有顯著性(P<0.01或P<0.05)。正常對照組及假手術(shù)組動物腎臟可見PAI-1的少量表達(dá)，但兩組表達(dá)無明顯差異；與假手術(shù)組相比較，造模組術(shù)后第7、14天表達(dá)表達(dá)明顯增加，其差異有顯著性(P<0.01)；在治療組，術(shù)后第1、4天與UUO手術(shù)組對應(yīng)觀察點(diǎn)相比較，PAI

8、-1表達(dá)無明顯改變，而術(shù)后第7、14天與對應(yīng)觀察點(diǎn)相比較，PAI-1表達(dá)明顯減少，差異有顯著性(P<0.01)。正常對照組及假手術(shù)組動物腎臟可見Col Ⅰ及Col Ⅲ的少量表達(dá)，但兩組表達(dá)無明顯差異；與假手術(shù)組相比較，UUO組及治療組Col Ⅰ、Col Ⅲ的表達(dá)在術(shù)后第7、14天明顯增加(P<0.01)，而與UUO組相比，阿魏酸鈉治療組在術(shù)后第7、14天Col Ⅰ及Col Ⅲ的表達(dá)明顯降低(P<0.01)。 結(jié)論：在UUO術(shù)后，