川芎嗪對單側(cè)輸尿管梗阻大鼠腎間質(zhì)纖維化的保護(hù)作用.pdf

1、目的：觀察單側(cè)輸尿管梗阻（UUO）大鼠模型分化抑制因子1（Id1）蛋白與腎小管上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化（EMT）的關(guān)系以及川芎嗪對UUO大鼠腎間質(zhì)纖維化是否有抑制作用，其腎臟保護(hù)作用的可能機(jī)制。
　　 方法：60只清潔級(jí)雄性SD大鼠，隨機(jī)分為A組（假手術(shù)組）、B組（UUO組）、C組（川芎嗪組）、D組（厄貝沙坦組），每組各15只。在無菌條件下行左側(cè)輸尿管結(jié)扎術(shù)，其中A組開腹后，分離出左側(cè)輸尿管，但不結(jié)扎，其余步驟相同。術(shù)前1日開始，

2、 C組給予川芎嗪混懸液40 ml.kg-1.d-1（腹腔注射），D組給予厄貝沙坦50 mg.kg-1.d-1（溶于適量生理鹽水中灌胃），A組和B組給予等量生理鹽水灌胃，每日一次。在術(shù)后分別于第3、7和14天取出左側(cè)腎臟后處死動(dòng)物。取左腎下極約1/3腎組織，垂直于腎門將腎組織分成3份，1份放入中性甲醛固定液中，1份放入FAA固定液中，余下組織迅速放入液氮灌中，爾后-80℃冰箱保存測熒光實(shí)時(shí)定量PCR（real-time PCR）。然后行石

3、蠟包埋，分別用于馬松染色（MASSON）、蘇木素伊紅染色（HE）、過碘酸-Schiff（PAS）染色及免疫組織化學(xué)染色。病理染色觀察4組大鼠腎間質(zhì)面積改變及腎間質(zhì)纖維化的程度，炎癥細(xì)胞浸潤與腎小管上皮細(xì)胞及管腔形態(tài)變化等。免疫組化法檢測腎間質(zhì)中轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）、Id1、小窩蛋白1（Cav1）、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）、E-鈣粘蛋白（E-cadherin）及Ⅰ型膠原的分布與表達(dá)，并進(jìn)行病理圖象分析，計(jì)算陽性面積比

4、率。采用單因素方差分析法分別在各時(shí)間點(diǎn)將4組作比較，并在一組內(nèi)將同一時(shí)間點(diǎn)樣本兩兩間進(jìn)行t檢驗(yàn)。并在B組內(nèi)將免疫組化指標(biāo)表達(dá)量變化進(jìn)行相關(guān)性分析。應(yīng)用SPSSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測各組腎組織Id1mRNA的表達(dá)。于術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)評估腎間質(zhì)纖維化程度及腎小管間質(zhì)損害程度。其中腎小管間質(zhì)損害程度采用百分比評分法進(jìn)行評估。
　　 結(jié)果：
　　 1、腎組織病理及膠原含量的變化：肉眼觀察B組術(shù)后，結(jié)扎側(cè)腎臟腫

5、大，腎盂腎盞擴(kuò)張，腎實(shí)質(zhì)變薄。光鏡示：B組隨梗阻時(shí)間延長，腎臟逐漸出現(xiàn)腎小管擴(kuò)張及萎縮，腎間質(zhì)單核淋巴細(xì)胞浸潤，由皮髓交界處開始逐漸出現(xiàn)間質(zhì)纖維化，而腎小球無明顯病理變化，與A組小管損傷程度及間質(zhì)纖維化的程度同時(shí)間點(diǎn)相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。C組和D組可減輕小管損傷程度、間質(zhì)纖維化程度及減少Ⅰ型膠原含量，與B組各時(shí)間點(diǎn)相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05），且治療組之間差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。
　　 2、川芎嗪抑

6、制腎小管上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化：
　　 （1）Id1、Cav1的表達(dá)：從術(shù)后第3天起，B組Id1蛋白及Id1mRNA的表達(dá)已明顯增加，Id1mRNA表達(dá)于術(shù)后3天達(dá)峰，為：（0.044±0.0011），且表達(dá)減少，至14天時(shí)降至（0.019±0.008），而Id1蛋白表達(dá)于第7天達(dá)高峰，B組各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p均<0.05）；與B組相比，C組從第7天起抑制Id1蛋白表達(dá)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05），且持續(xù)至第14天；C

7、和D組比較抑制作用無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p>0.05）。Id1蛋白的陽性面積與腎組織中Cav1的含量明顯正相關(guān)，且兩者均顯著表達(dá)于擴(kuò)張，壞死的近端腎小管上皮細(xì)胞。A組Cav1于腎小球囊壁層上皮細(xì)胞，B組術(shù)后3天近端小管上皮細(xì)胞表達(dá)明顯升高，為：（16.05±4.768vs2.95±0.911）％（p<0.05）。C和D組Cav1的升高趨勢被抑制，與B組相比，C組術(shù)后第3天即出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義為（9.74±1.831vs16.05±4.768）（p<

8、0.05）。C、D兩組間差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。
　　 （2）細(xì)胞類型標(biāo)記抗體的表達(dá)：A組正常腎上皮組織可見Ecadherin顯著表達(dá)，在腎間質(zhì)的陽性面積為（40.98±4.801）％，血管平滑肌細(xì)胞和間質(zhì)有極少量成纖維細(xì)胞α-SMA表達(dá)陽性。UUO術(shù)后第3天起，B組Ecadherin的表達(dá)即開始下降，腎小管上皮細(xì)胞出現(xiàn)α-SMA表達(dá)，與A組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。與B組相比，C及D組均反相調(diào)節(jié)上述因子表達(dá)；

9、川芎嗪延緩Ecadherin的下調(diào)持續(xù)至術(shù)后14天，時(shí)間較厄貝沙坦組長；兩種藥物抑制α-SMA表達(dá)均于術(shù)后7天顯著，兩組間差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p>0.05。
　　 （3）促纖維化因子（TGF-β1）的表達(dá)：TGF-β1 A組腎小管偶有著色且不明顯，B組術(shù)后其表達(dá)遍布于皮質(zhì)與髓質(zhì)損傷的腎小管，且表達(dá)量隨小管損傷范圍的增加及腎間質(zhì)纖維化的加重呈明顯升高趨勢。術(shù)后第3天，B組大鼠腎組織TGF-β1表達(dá)量較假手術(shù)組有明顯增加，第14天達(dá)高